SDS-PAGE 作為一個(gè)老生常談的實(shí)驗，早已廣為科研者所知。然而該實(shí)驗雖然基礎，但是細節繁瑣，耗時(shí)長(cháng)久，光是配制試劑就要花費 2 個(gè)小時(shí)左右。而這還只是 Western blot（WB）的第一步，也使得完成 WB 實(shí)驗將會(huì )耗費 2 天左右的時(shí)間。 這也難怪科研者們常說(shuō)，一入 WB 深似海，從此休閑是路人。不過(guò)，實(shí)踐出真知，長(cháng)期在該實(shí)驗里跌爬滾打也總結出了若干小技巧，可使大家輕松快捷的完成該實(shí)驗。

1、未雨綢繆，做好萬(wàn)全準備 

常言道，不打無(wú)準備之仗，方能立于不敗之地。實(shí)驗中種種試劑、抗體等等均是完成實(shí)驗這座大廈的基石，如果基石打不牢，實(shí)驗很有可能會(huì )半路夭折。而實(shí)驗中最痛苦的莫過(guò)于與實(shí)驗結果就差那么一步之遙。

以 Western blot（WB）為例，這眼瞅著(zhù)就要到條帶現身的奇跡時(shí)刻，卻愣是讓曝光試劑的匱乏給硬生生的截斷了見(jiàn)證過(guò)程，又怎會(huì )不讓人懊惱上火呢？ 

其實(shí)，上述窘境皆是科研者在實(shí)驗前準備不足所致，若是能提前發(fā)現試劑的不足，或對試劑重新訂購，又或者重新配制溶液，均能再次推進(jìn)實(shí)驗進(jìn)程。然而就這訂購或配制試劑的過(guò)程無(wú)疑會(huì )消耗我們的時(shí)間以及精力。 

那么為了避免原材料浪費以及節省更多的時(shí)間，SDS-PAGE 電泳過(guò)程中的一些試劑還是早早的配制并妥善保存起來(lái)為好，如此方可以備不時(shí)之需。

緩沖液（buffer）: 

關(guān)于這一點(diǎn)，你可能早已知曉，但再次重復一遍也不是壞事。實(shí)驗中可將所有的凝膠緩沖液進(jìn)行一次性大量配制，如此可方便后續實(shí)驗中對其的任意使用。至于配制的濃度，10x 濃度是實(shí)驗室配制母液常用的濃度。有些實(shí)驗室會(huì )多次重復利用這些凝膠電泳緩沖液，在這種情況下，建議每次使用 buffer 時(shí)均要在緩沖瓶上貼一個(gè)標簽，已記錄使用的次數，超過(guò)一定期限后就要對緩沖液進(jìn)行重新配制，以免對實(shí)驗結果造成影響。

過(guò)硫酸銨（APS）： 

在接觸 SDS-PAGE 電泳之初，每次配膠時(shí)均會(huì )制備新鮮的 APS，可后來(lái)發(fā)現溶解后的 APS 在分裝后，可在-20℃冰箱中得以長(cháng)期儲存。另外，如果你需要經(jīng)常使用 SDS-PAGE 凝膠，那么可取出一只分裝后的 APS 溶液，將其置于 4℃冰箱里，可保證其一個(gè)月不會(huì )過(guò)期。

凝膠（gel）： 

凝膠是現用現配的好，已成為了各位心中的常識，那么是不是就意味著(zhù)凝膠不能提前制備么？其實(shí)不然，提前準備好的凝膠在 4℃冰箱中大致可以保持兩周左右。但需要謹記的是在儲存凝膠時(shí)，保持凝膠濕潤是非常重要?？梢詫⒛z板、梳子甚至整個(gè)固定裝置都裝入一個(gè)充滿(mǎn)蒸餾水的塑料盒中，而后再將其放在 4℃冰箱中進(jìn)行保存。

樣品（sample）：

大家都知道，制備好的蛋白樣品要放在-20℃冰箱中進(jìn)行存儲，有時(shí)一些稀少珍貴的樣品甚至還要放在-80℃冰箱里保存。在此，建議在儲存近期就要進(jìn)行 PAGE 電泳的蛋白樣品時(shí)，可將該蛋白樣品與 loading  buffer 混合在一起，加熱變性之后再進(jìn)行儲存。如此就可以在上樣前，將蛋白樣品解凍并離心即可。用該法儲存樣品長(cháng)達一年的時(shí)間，且實(shí)驗結果依然沒(méi)有被破壞。

2、改變分離膠的覆蓋液體 

通常多數人在制備好分離膠后，會(huì )用蒸餾水覆蓋其上，以避免分離膠的高低不平。但是實(shí)際上，此時(shí)用異丙醇代替水的效果會(huì )更好，因為異丙醇可以更好保護凝膠，并使凝膠更快地發(fā)生聚合，進(jìn)而節省制膠的時(shí)間。

3、緩沖液不夠用？準備些彈珠吧 

有時(shí)，實(shí)驗過(guò)程中，你會(huì )忽然發(fā)現沒(méi)有足夠的電泳緩沖液，此時(shí)一個(gè)節省時(shí)間的方法就是在現有電泳緩沖液添加一些彈珠（是的，就是我們小時(shí)候曾經(jīng)玩過(guò)的），以提高緩沖液的高度水平來(lái)保證緩沖液能沒(méi)過(guò)上樣孔。 但是要確保這些彈珠是潔凈的，否則一旦其對上樣的蛋白樣品造成了污染，就不要妄想此次實(shí)驗會(huì )得到一張漂亮的實(shí)驗結果圖片了。

4、傳輸緩沖區 

每個(gè)做 SDS-PAGE 電泳的童鞋，只怕都擔心過(guò)內腔中的電泳緩沖液會(huì )有所泄露，畢竟當緩沖液水平降低過(guò)多，以至于不能達到覆蓋加樣孔時(shí)，就會(huì )導致孔內變得干燥，進(jìn)而使得凝膠電泳變得無(wú)法正常運行。也許，有人會(huì )建議你，當你發(fā)現緩沖液下降的太過(guò)厲害，則需要暫停電泳，打開(kāi)電泳槽，重新給內腔添加電泳液，而后再次開(kāi)啟電泳過(guò)程?？赡茈娪酒陂g你會(huì )多次重復該過(guò)程直至實(shí)驗完成為止。

顯然，該方法需要大家時(shí)刻關(guān)注電泳槽內腔類(lèi)電泳液的高低水平變化，其實(shí)也是蠻費時(shí)費力的。而有個(gè)簡(jiǎn)單粗暴的做法，即一次性在內腔外部也添加同水平的電泳液，如此便可以一勞永逸的解決內腔電泳液泄露問(wèn)題。

參考文獻：SDS-PAGE Tips and Tricks to Save You Time