一、凈化空氣

在開(kāi)始任何組織培養工作之前，打開(kāi)新風(fēng)系統至少15分鐘，確保有清潔的空氣流入。要始終確保沒(méi)有任何東西覆蓋它。每周打開(kāi)紫外線(xiàn)燈3-4次，最多半個(gè)小時(shí)，可以幫助保持你的實(shí)驗室無(wú)污染，但你應該記住，紫外線(xiàn)只會(huì )殺死它直接照射到的微生物。紫外線(xiàn)照射對眼睛和皮膚也是有害的，所以在使用遮光罩時(shí)，請保持光線(xiàn)關(guān)閉。在工作前后用消毒劑擦拭超凈臺（大多數人使用70%的乙醇，但你也可以使用Incidin濕巾）。

二、遠離污染物

雖然你很可能是實(shí)驗的主要污染源，但是你*有必須要采取你所及的的預防措施，防止細胞受到污染。用70%乙醇擦拭實(shí)驗室的所有東西，包括你戴手套的手！你還應該在開(kāi)始之前把所有的珠寶和你戴的手表都取下來(lái)。此外，避免不必要的交談，因為交談會(huì )產(chǎn)生微生物氣溶膠，可能會(huì )進(jìn)入超凈臺。在進(jìn)入實(shí)驗室前*計劃你的實(shí)驗是另一個(gè)防止污染的好方法。這聽(tīng)起來(lái)很瑣碎，但往往能在問(wèn)題出現之前解決大多數問(wèn)題。有了適當的計劃，你就可以確切地知道你需要把什么材料帶進(jìn)實(shí)驗室，并且可以帶入之前把它們都擦干凈。

三、分裝試劑，保持實(shí)驗室整潔

儲物柜最好不要帶護罩。雜亂無(wú)章不僅使你的工作區很難清潔干凈，而且還會(huì )破壞工作區周?chē)膶恿鳉饬?。確保只將所需材料帶入工作區域。這將給你足夠的空間自由移動(dòng)而不會(huì )造成泄漏。另外，當液體容器不能立即使用時(shí)，請將其蓋緊。防止泄漏，但如果發(fā)生任何泄漏，應立即用70%乙醇擦拭。最后，避免將移液管直接插入培養基瓶中，而應先將溶液倒入一次性無(wú)菌管中，分裝使用不但能方便管理更能避免出現大規模的污染。

四、確保細胞不要離開(kāi)培養箱太久

當你準備東西的時(shí)候，確保你的細胞不會(huì )在外面呆太久。培養箱的舒適區通常在37度左右°5%的二氧化碳，溫度突然變化（尤其是開(kāi)空調的時(shí)候）會(huì )讓細胞變得焦躁不安，所以把它們放在無(wú)菌培養箱中。這也意味著(zhù)任何與細胞接觸的培養基或洗滌緩沖液，如PBS（磷酸鹽緩沖鹽水），都應該在37°C.這也是大多數實(shí)驗室都有一個(gè)37度的水浴目的。

五、注意細胞的形狀和大小

你應該在超凈臺附近放一個(gè)光學(xué)顯微鏡，這樣你可以定期觀(guān)察你的細胞（在進(jìn)入實(shí)驗室之前和將它們放入培養箱時(shí)）。這也有助于熟悉你正在使用的細胞系的形態(tài)，以便識別交叉污染。即使某些哺乳動(dòng)物細胞系具有相似的形態(tài)，但是觀(guān)察細胞是否污染，顯微鏡一定不可少。

六、合理的設置細胞傳代

不要偷懶于分割細胞，而要形成一個(gè)常規。對于大多數快速生長(cháng)的細胞系（如HEK293，每16小時(shí)增殖一次），一周兩次通常有效。例如，如果你在星期一將細胞稀釋1:5進(jìn)行傳代，你應該可以在下一個(gè)星期四，或者最遲在星期五進(jìn)行分裂。最好在細胞板80-85%匯合之前分裂細胞，因為細胞這個(gè)時(shí)候屬于生長(cháng)鼎盛期。如果它們達到匯合點(diǎn)，就會(huì )進(jìn)入平頂期，它們就會(huì )停止生長(cháng)（接觸抑制），經(jīng)過(guò)傳代后需要時(shí)間才能恢復。這可能會(huì )改變它們的生長(cháng)速率和形態(tài)，使得它們不適宜繼續用于需要可復制結果的實(shí)驗。大多數細胞培養基含有pH指示劑酚紅（pH范圍6.0（黃色）-8.0（紅色））。血液pH值通常在7.35-7.4左右，因此哺乳動(dòng)物細胞對pH值很敏感。橙色和淺橙色之間的顏色通常都表明細胞需要換液或者已經(jīng)足夠生長(cháng)，通過(guò)分泌乳酸（細胞代謝的副產(chǎn)物，對細胞有毒）使周?chē)慕橘|(zhì)變酸，這個(gè)時(shí)候若細胞密度太大就選擇傳代。

七、細胞狀態(tài)就是力量！

當用一個(gè)新的細胞系開(kāi)始培養時(shí)，將細胞生長(cháng)，將其等分成若干小瓶，冷凍，除一個(gè)外，其余全部?jì)Υ嬖谝旱?。冷凍的小瓶組成了你的主庫存，而你可以用剩下的小瓶來(lái)生長(cháng)和冷凍額外的細胞，這些細胞可以作為你的工作庫存。這可以確保您有許多細胞儲存在其原始狀態(tài)，一旦工作細胞變得太老化或污染。您還有之前的庫存細胞可以取代。這也確保了任何在實(shí)驗室需要新細胞的人都可以帶上一瓶“原始狀態(tài)"的主庫存，而不是“借用"已經(jīng)經(jīng)過(guò)多次傳代并可能被污染的細胞。

八、注意實(shí)驗用的細胞代次

注意傳代次數。細胞在高傳代數（>30-40倍）時(shí)會(huì )改變它們的生長(cháng)速度和形態(tài)，這取決于細胞系，所以舊細胞應該退役！相反，第3-4代年輕的細胞太年輕，不應該在立即用于重要的轉染實(shí)驗。額外的傳代可以讓你的細胞獲得穩定的生長(cháng)速度。

在你的盤(pán)子和/或燒瓶上貼上你的名字、日期、你使用的細胞系和它的通道號是一種很好的做法。特別是在一個(gè)多人從事不同工作的實(shí)驗室里，這將有助于你避免意外混合造成交叉污染，也有助于你保持良好的實(shí)驗記錄。

九、及時(shí)滅菌是細胞的狂歡！

最后，但并非最不重要的一點(diǎn)是，任何用于再利用的實(shí)驗室材料（例如，用于液體廢物的巴斯德移液管）在每次使用前都應消毒。此外，所有受污染的液體和固體廢物在處理前應進(jìn)行高壓滅菌。