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細胞培養無(wú)小事——如何選擇血清?
發(fā)布時(shí)間: 2021-09-29 點(diǎn)擊次數: 959次體外培養的細胞直接生活在培養基中,因此培養基需要滿(mǎn)足細胞對營(yíng)養成分、促生長(cháng)因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求;原代提取的時(shí)候選擇如何選擇培養基成了關(guān)鍵的問(wèn)題,此外在細胞提取的時(shí)候因血清可以模擬個(gè)體的生存環(huán)境,在提取細胞的時(shí)候血清一定不可少。
維持細胞生長(cháng)的營(yíng)養條件一般包括以下幾個(gè)方面:氨基酸,單糖,維生素,無(wú)機離子與微量元素,此外還有促生長(cháng)激素,滲透壓,pH 值,并保證在配制試劑的時(shí)候無(wú)毒無(wú)污染。
正常的培養細胞的培養基無(wú)非是基礎培養基加血清。血清是一個(gè)神秘的試劑,至今為止,它在細胞的生長(cháng)繁殖發(fā)揮著(zhù)重要甚至是難以替代的作用。
血清的主要成分: 血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動(dòng)物的性別、年齡、生理條件和營(yíng)養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(cháng)因子、激素、無(wú)機物等。
血清主要作用:提供基本營(yíng)養物質(zhì):氨基酸、維生素、無(wú)機物、脂類(lèi)物質(zhì)、核酸衍生物等,是細胞生長(cháng)必須的物質(zhì)。
血清的判斷標準如下:好的血清應該是透明清亮,土黃色或棕黃色,無(wú)沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現血清渾濁、不透明、含許多沉淀物,說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;一般血清反復凍融或者有支原體污染的時(shí)候都會(huì )出現血清沉淀多的情況,若血清呈棕紅色,說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高,取材時(shí)有溶血現象;如果搖晃時(shí)感覺(jué)液體稀薄,說(shuō)明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進(jìn)一步了解血清的質(zhì)量,則應連續培養某些細胞,觀(guān)察細胞生長(cháng)狀況。
質(zhì)量一般的血清在使用的時(shí)候建議滅活,即56℃30分鐘,主要是為了防止血清中的補體成分對細胞產(chǎn)生毒性,一般的血清不需要滅活,因為加熱也會(huì )導致一些刺激因子和蛋白的流失,不利于細胞的生長(cháng)。
血清一般儲存于-20℃,同時(shí)應避免反復凍融。反復凍融會(huì )導致血清中的蛋白釋出,從而會(huì )沉淀增多,購買(mǎi)大包裝的血清后,首先要滅活處理,然后分裝成小包裝,儲存于-20℃,使用前4度慢融。不同批次的血清會(huì )有很大的差異性,為了實(shí)驗統一和可重復性,建議購買(mǎi)血清之前先索取試用裝進(jìn)行測試,選定一批后就要保留足夠使用6個(gè)月至1年的量,直至用另一批經(jīng)過(guò)預先試驗的樣品代替。
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