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生化轉染的另一種選擇,磷酸鈣介導的轉染
發(fā)布時(shí)間: 2021-10-11 點(diǎn)擊次數: 1294次磷酸鈣介導的轉染方法應用于將外源DNA轉入培養的細胞,已有45年以上的歷史。Graham和van der Eb在磷酸鈣存在下,將病毒DNA導入哺乳動(dòng)物細胞的這一工作,為基因在多種哺乳動(dòng)物細胞中進(jìn)行瞬時(shí)表達奠定基礎。
因此,即使脂質(zhì)體介導的轉染方法是我們首先選擇,依然有很多實(shí)驗員在使用磷酸鈣介導的轉染。
他的主要原理是,磷酸鈣與DNA形成不可溶的沉淀物,即磷酸鈣-DNA復合物,吸附于細胞膜表面,通過(guò)細胞的內吞作用或吞噬作用,進(jìn)入細胞中。磷酸鈣起到促進(jìn)DNA進(jìn)入的細胞的作用。
磷酸鈣介導的轉染方法的優(yōu)點(diǎn):
1、細胞毒性低
2、可轉染大質(zhì)粒
3、操作簡(jiǎn)單
4、成本非常低廉。
但具有以下缺點(diǎn):
1、由于試劑的PH值對沉淀形成有巨大影響,對于不同核酸需要調整方案
2、有時(shí)會(huì )表現出免疫原性
3、對原代細胞無(wú)效
4、不能在細胞培養基中制備轉染復合物。
在使用上有很多需要注意的地方,這可能也是在生化方法中,脂質(zhì)的優(yōu)先級別更高的理由
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