Q：剛收到細胞，顯微鏡觀(guān)察細胞成片漂浮，該如何處理？

可能是消化過(guò)度導致了部分細胞的細胞膜受損、凋亡，部分細胞膜受到破壞，導致細胞生長(cháng)緩慢。若細胞形態(tài)有明顯變化，且細胞表面有明顯黑點(diǎn)，間隙間也有較多黑點(diǎn)，可能是支原體污染，建議空培養細胞培養基，觀(guān)察黑點(diǎn)是否會(huì )增殖。

若還有保種細胞，請復蘇靠前代次，并注意觀(guān)察拍照，有任何問(wèn)題可以及時(shí)聯(lián)系我司銷(xiāo)售處理售后（需提供細胞圖片）。

凍管到貨時(shí)的剩余干冰情況、收貨后的保存情況、使用的血清、培養基以及復蘇操作不當等原因都可能影響細胞復蘇情況。

貼壁細胞：

若復蘇時(shí)離心，建議48h后換液，如密度達到10%，則繼續按說(shuō)明書(shū)正常操作培養；若復蘇時(shí)沒(méi)有離心，建議收集懸浮細胞后重新接種。若細胞依然無(wú)貼壁增殖，請及時(shí)反饋銷(xiāo)售處。

懸浮細胞：

建議復蘇48小時(shí)后觀(guān)察拍照，若培養基沒(méi)有變色，部分細胞仍然比較圓潤，可繼續放置培養后48小時(shí)拍照。若細胞全部皺縮，請及時(shí)聯(lián)系銷(xiāo)售處理售后。

可能原因如下：

1. 沒(méi)有及時(shí)換液，導致培養基酸度增強、營(yíng)養成分降低時(shí)會(huì )出現細胞胞漿產(chǎn)生及空泡；

2. 沒(méi)有及時(shí)傳代，細胞生長(cháng)過(guò)密，少數細胞開(kāi)始在鋪滿(mǎn)的第一層細胞上生長(cháng)。很多細胞開(kāi)始漂浮時(shí)，也有部分細胞出現空泡變性；

3. 若密度很低，則細胞密度提高會(huì )有所改善，可以提高血清濃度或更換質(zhì)量更好的血清。若密度高，請及時(shí)更換培養基，注意培養基添加量和換液情況，保證細胞有足夠營(yíng)養。

細胞消化時(shí)間一般在2~3min，消化期間請不要晃動(dòng)培養瓶，部分細胞需要延長(cháng)消化時(shí)間，或用PBS清洗2次，吸干凈瓶里殘留的PBS后用少量胰酶潤洗，再次添加1ml胰酶進(jìn)行二次消化。

消化時(shí)放入培養箱，2~3分鐘后取出，用手掌心拍打瓶尾觀(guān)察細胞脫落情況，如沒(méi)有細胞脫落則繼續放培養箱。如果消化5分鐘也沒(méi)有脫落或只有輕微細胞脫落，可以繼續放培養箱，或把消化下來(lái)的細胞收集終止消化后，將培養瓶?jì)鹊募毎^續添加1~2ml胰酶繼續消化。

當細胞有80%左右脫落且成單個(gè)細胞后，可終止消化，用吸管吹打瓶里各部位4~8次，盡量用吸管不用槍頭，不要吹出氣泡，然后收集懸液進(jìn)行離心。

剛收到的細胞如更換了培養基或血清，會(huì )存在變形的情況，屬正常情況，需要一定的適應過(guò)程。當體外培養時(shí)間增長(cháng)后，隨著(zhù)傳代次數的增多，細胞形態(tài)也會(huì )有觸角、拉絲、變瘦等變化，可能與消化時(shí)間和培養條件有關(guān)。

可能原因如下：

1. 可能是棉球纖維、凋亡細胞片、血清蛋白，或一些無(wú)血清培養基添加因子后的因子析出物，屬于正?，F象；

2. 如果是傳代后細胞堆積成團，肉眼可見(jiàn)白色點(diǎn)狀物，則是消化沒(méi)有吹散開(kāi)或消化過(guò)度導致的細胞抱團自救，建議在細胞密度變高后改善消化過(guò)程。

消化過(guò)度可能導致部分細胞的細胞膜受損、凋亡，導致細胞生長(cháng)緩慢?？梢杂肞BS洗掉凋亡細胞后，提高一定血清濃度培養，并且改善消化時(shí)間。

· 細菌污染

細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，鏡下可見(jiàn)黑色的到處亂跑的黑點(diǎn)。細胞一旦出現細菌污染，爆發(fā)會(huì )很快，培養基很快會(huì )出現渾濁，且細胞狀態(tài)明顯變差。

· 真菌污染

一般培養液清亮不變色，鏡下有絲狀物。有些真菌開(kāi)始很像死細胞碎片，只是有很多很多的小塊很清楚，呈珊瑚狀，不像細胞碎片分不清，慢慢會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。真菌生長(cháng)的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現。

實(shí)驗室較典型的污染真菌是白色念珠菌，它存在于人的口腔和生呼吸道等處。

· 霉菌污染

培養基是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)。在37度孵箱中培養2~3天，仍清亮，但出現絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)明顯菌絲。長(cháng)時(shí)間后，細胞雖然仍可生長(cháng)，但活力狀態(tài)變差。

· 支原體污染

支原體為黑色小點(diǎn)，培養基一般會(huì )渾濁。支原體感染細胞后，細胞病變不明顯，只是慢慢死亡。