細胞培養的概念：

    細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養條件等），使之生存、生長(cháng)、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。細胞培養技術(shù)可以由一個(gè)細胞經(jīng)過(guò)大量培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極少分化的多細胞，通過(guò)細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長(cháng)增殖等。

細胞培養所需的儀器設備：

細胞培養所需的試劑：

細胞培養的類(lèi)別：

原代細胞(primary cell)是指從機體的組織中經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得、并在體外進(jìn)行培養的細胞，稱(chēng)為原代細胞。一般認為，培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以?xún)鹊募毎y稱(chēng)為原代細胞培養。

細胞系(cell strain)：原代培養物經(jīng)胰酶等物質(zhì)第一次消化傳代后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱(chēng)為有限細胞系，如可以連續培養，則稱(chēng)為連續細胞系，培養50代以上并無(wú)限培養下去。

細胞株(cell line)：從細胞系中用單細胞分離培養或篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱(chēng)細胞株。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個(gè)培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代有限，稱(chēng)為有限細胞株；如果可以連續傳代，稱(chēng)為連續細胞株。

細胞培養的過(guò)程：

細胞復蘇：

將凍存的細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動(dòng)直到*融化后放入離心機中，800rpm-1000rpm，5min，然后在超凈臺中將上清液棄掉，加入1ml預熱的培養基，輕輕吹勻后轉移到培養瓶中，補足細胞生長(cháng)所需的培養基，呈“十"混勻后放入含5%CO₂的細胞培養箱中培養。

細胞傳代：

待細胞密度達到80%~90%時(shí)，棄去原培養基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱中（不同的細胞消化時(shí)間不同）。待細胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養基進(jìn)行中和，輕輕吹吸混勻，根據細胞生長(cháng)特性進(jìn)行1：2或1：3傳代培養。

細胞凍存：

待細胞密度達到80%~90%時(shí)，棄去原培養基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱中（不同的細胞消化時(shí)間不同）。待細胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養基進(jìn)行中和，輕輕吹吸混勻，轉移到離心管中800rpm-1000rpm，5min進(jìn)行離心，然后在超凈臺中將上清液棄掉，加入1ml凍存液，放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證梯度降溫），立即放入一80℃冰箱內，第二天轉入液氮中，可以保存至少兩年。

凍存液的配制：70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO。

細胞培養中常見(jiàn)的污染及處理辦法：

真菌：一般培養基不會(huì )變渾濁，保持清亮，顯微鏡下可觀(guān)察到絲狀物，有的真菌剛開(kāi)始會(huì )像細胞碎片，慢慢會(huì )長(cháng)出黑色絲狀物，對細胞的生長(cháng)有明顯的影響。