將質(zhì)粒DNA轉化入細菌的過(guò)程稱(chēng)為轉化。

轉化通常有兩種方法：化學(xué)轉化法和電穿孔法。

電穿孔法的轉化率高達 10⁹ ～ 10¹⁰個(gè)轉化子/μg 質(zhì)粒 DNA，轉化率比化學(xué)轉化法高，當可能得到的每一個(gè)克隆都非常重要時(shí)（如構建cDNA文庫），就需要用電穿孔法。

化學(xué)轉化法一般每微克 DNA 能獲得10⁵ ～ 10⁶個(gè)轉化子，可滿(mǎn)足常規的克隆實(shí)驗需求，因此化學(xué)轉化法在克隆實(shí)驗中是較為常用到的轉化方法。

化學(xué)轉化法中用到的感受態(tài)細胞是化學(xué)感受態(tài)細胞，化學(xué)感受態(tài)細胞常用冰預冷的CaCl2處理細菌的方法來(lái)制備。

化學(xué)感受態(tài)細胞轉化的實(shí)驗步驟可以簡(jiǎn)單分為以下4步：

1、冰上融化感受態(tài)細胞，將DNA加入感受態(tài)細胞中，輕彈管壁混勻，冰上放置30 min

2、42 ℃熱激，冰上孵育2 min

3、加入不含抗生素的LB培養基，37 ℃復蘇

4、離心后棄部分上清，重懸后涂板，過(guò)夜培養

化學(xué)感受態(tài)細胞轉化的第一步，加入DNA后，輕彈管壁混勻，冰上靜置，使Ca2+與DNA結合中和DNA的負電荷，Ca2+與細菌細胞膜結合中和電荷，克服了外來(lái)DNA和細菌細胞膜之間的負電荷排斥作用。Ca2+與DNA和細菌細胞膜脂多糖的磷酸鹽形成配位絡(luò )合物，Ca2+促進(jìn)了DNA和脂多糖的結合。

圖2.Ca2+克服了外來(lái)DNA和細菌細胞膜之間的負電荷排斥

化學(xué)感受態(tài)細胞轉化的第二步是熱激。熱激使溫度升高，細胞膜的脂質(zhì)釋放（圖3-A），在細胞膜上形成孔隙（圖4-E），DNA進(jìn)入細菌內部。熱激后在冰上冷卻2 min，溫度降低，細胞膜的蛋白質(zhì)釋放（圖3-B），脂質(zhì)占比增高，細胞膜的流動(dòng)性升高，細胞膜上的孔隙消失（圖4-F）。

圖3. A：脂質(zhì)釋放曲線(xiàn)，B：蛋白質(zhì)釋放曲線(xiàn)

圖4.感受態(tài)細胞在轉化過(guò)程中表面形態(tài)的變化

化學(xué)感受態(tài)細胞轉化的第三步，加入LB培養基，37 ℃復蘇，該步驟的主要作用是使感受態(tài)細胞恢復生長(cháng)，使感受態(tài)細胞中的質(zhì)粒表達抗性基因，這樣在涂板后帶有目標質(zhì)粒的大腸桿菌在相應抗性的平板上才能正常生長(cháng)。