01
為什么要在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?
答:胰蛋白酶在4℃就可能開(kāi)始降解,如果在室溫下放置超過(guò)30分鐘,就會(huì )變得不穩定,但是胰酶在消化細胞前必須要預熱,否則容易出現酶活力不夠, 也會(huì )導致細胞消化不下來(lái),所以為了更好的培養細胞,在細胞培養不多的時(shí)候可以分裝使用,這樣就不會(huì )出現上面的兩種情況了,還有就是配制胰酶的時(shí)候一定要注意降低熱源哦。
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為什么要在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?
答:胰蛋白酶在4℃就可能開(kāi)始降解,如果在室溫下放置超過(guò)30分鐘,就會(huì )變得不穩定,但是胰酶在消化細胞前必須要預熱,否則容易出現酶活力不夠, 也會(huì )導致細胞消化不下來(lái),所以為了更好的培養細胞,在細胞培養不多的時(shí)候可以分裝使用,這樣就不會(huì )出現上面的兩種情況了,還有就是配制胰酶的時(shí)候一定要注意降低熱源哦。
02
培養細胞生長(cháng)減慢的原因有哪些?其解決辦法有哪些?
答:可能得原因有:更換了不同的培養液或血清;培養液中一些細胞生長(cháng)必需成分如谷氨酰胺或生長(cháng)因子等耗盡或缺乏或已被破壞;培養物中有少量細菌或真菌污染;試劑保存不當;比較新培養液與原培養液組分,比較新血清與舊血清支持細胞生長(cháng)實(shí)驗找到可能的原因。
解決辦法:增加起始培養細胞濃度;讓細胞逐漸適應新培養液;換入新鮮配制培養液;補加谷氨酰胺或生長(cháng)因子等;用無(wú)抗生素培養液培養,如發(fā)現污染,丟棄培養物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培養液需在2-8℃避光保存;含血清*培養液在2-8℃保存,并在2 周內用完;分離培養物,檢測支原體。
03
如何消除組織培養的污染?
答:當重要的培養細胞污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開(kāi),用實(shí)驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過(guò)濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實(shí)驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素和抗霉菌素如時(shí)尤其重要。
要是支原體污染,可以選擇我們的支原體抑制劑(啟達生物;貨號:SD0034)來(lái)抑制支原體的生長(cháng),它可使大部分的支原體清除干凈,也可少量頑固的支原體。黑膠蟲(chóng)污染也使目前實(shí)驗室的一大問(wèn)題,黑膠蟲(chóng)清除劑對藥物的量和要求都很高,首先,使用的抗菌小分子純化度要高,這樣可降低產(chǎn)品本身存在的內毒素,其次是加入的量,量少會(huì )清除不干凈黑膠蟲(chóng),但是量多會(huì )導致細胞的死亡,可以直接選擇我們的黑膠蟲(chóng)抑制劑(啟達生物;貨號:SD0036) 1ml/支裝,每100ml只需100ul即可,關(guān)鍵是價(jià)格,優(yōu)惠到您不能想象 。