1. 制備活躍生長(cháng)著(zhù)的細胞。從單層培養細胞（約鋪滿(mǎn) 75% 表面積）中吸去培養基。用預熱至 37℃ 的無(wú)血清培養基沖洗兩次（培養基中應該不含蛋氨酸和半胱氨酸）。對于懸浮培養細胞，通過(guò) 400 g 離心 5 分鐘收集細胞。用頂熱至 37℃ 的無(wú)蛋氨酸培養基重懸沉淀，400 g 離心 5 分鐘。盡可能地去掉上清，用無(wú)蛋氨酸培養基重懸細胞至 107 細胞/ml 后轉移至一塊小培養板。

2. 加入預熱的無(wú)蛋氨酸和半胱氨酸的培養基，于 37℃ 培養 20 分鐘，以耗盡胞內含硫氨基酸庫。

3. 吸去培養基，立刻換上預熱的、無(wú)蛋氨酸和半胱氨酸何含有適量標記氨基酸的新鮮培養基，依據預實(shí)驗結果，將細胞于 37℃ 培養一定時(shí)間（對于末做過(guò)預實(shí)驗的蛋白質(zhì)，以 2~4 小時(shí)作為初始值比較合適）

4. 移去放射性培養基。對于單層培養細胞，吸出即可。懸浮培養細胞則可轉至試管，400 g 離心 5 分鐘，倒去上清。

5. 準備一塊凍至 0℃ 的平板（如放在冰盒上的鋁板），將單層細胞培養板放上去。用冰冷的 PBS 沖洗兩次，沖洗液都到進(jìn)放射性廢料桶。懸浮培養細胞用 PBS 重懸，400 g 離心 5 分鐘，倒去上清。

6. 抽干細胞上殘留的 PBS，裂解細胞。