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高效率轉染N2a小鼠神經(jīng)瘤母細胞的操作方法
發(fā)布時(shí)間: 2021-11-11 點(diǎn)擊次數: 1457次轉染條件:
培養板:6孔板
轉染質(zhì)粒DNA大?。?6000bp
轉染試劑用量:10ul
核酸用量:電訊
轉染時(shí)間:48小時(shí)
轉染試劑:Advanced DNA RNA轉染試劑(AD600150)
培養基:Z7181-500 胎牛血清
細胞凍存:CE70100T無(wú)血清細胞凍存液
操作步驟:
提前 1 天接種細胞:細胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉染。
核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細胞培養基中加入核酸復合物:根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養基 里面可以含有血清。
細胞換液:轉染 24 小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液,懸浮細胞轉染過(guò)程中不用換液。
分析結果:質(zhì)粒 DNA 轉染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉染效率,48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。若進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選,則在轉染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉染后 9 小時(shí)熒光檢測轉染效率,48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。
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