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大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞培養實(shí)驗——機械性劃割培養

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-05　　點(diǎn)擊次數： 900次

材料與儀器
SD大鼠
硼酸硼砂緩沖液胰酶-EDTA 消化液 D-Hanks’
眼科剪滴管離心機培養皿 CO2培養箱
步驟

一、實(shí)驗步驟

1. 孕16 d SD 大鼠經(jīng)戊巴（匕匕）妥鈉麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開(kāi)皮膚、肌肉、皮下筋膜，無(wú)菌操作下取出胚胎放入預冷的D-Hanks’平衡鹽液中。

2. 在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱內消化20 min，中間搖晃一次。

3. 隨后用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的培養液(DMEM＋10%FBS)的離心管內終止消化液作用5 min。

4. 用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的 DMEM＋10%FBS 的離心管內，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數次，靜置后取上清吸到另一支離心管內。重復上述步驟 2～3 次。

5. 將所收集的上清經(jīng)200 目篩網(wǎng)過(guò)濾。

6. 過(guò)濾后的細胞懸液于800 rpm 離心5 min，棄上清，管內加入新鮮培養液(DMEM＋20%FBS)并吹打成單細胞懸液。

7. 細胞計數，調整細胞密度按1.5x105/cm2 種入6 孔板內，放入CO2 孵箱中培養。培養48 h 后換液并加入Ara-C使其終濃度為 1x10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量換液。以后每隔 3 天半量換液一次。

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