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染色體制備
發(fā)布時(shí)間： 2022-12-13 點(diǎn)擊次數： 961次原理
固定阻滯于分裂中期的細胞，在低滲液中膨脹，將細胞滴在載玻片上，染色，觀(guān)察 [ Rothfels and Siminovitch，1958；Rooney and Czepulkowski，1986 ] 。
材料與儀器
D-PBS 0.25%胰蛋白酶 對數期的培養細胞 秋水仙酰胺
低滲溶液 醋酸甲醇固定液 Giemsa染液 DPX或Permount封固劑 冰
離心管 巴斯德吸管 載玻片 蓋玻片 載玻片盒 低速離心機 渦流混懸器步驟
1. 將 2× 104~ 5× 104 個(gè)細胞 /ml （4× 103~ 1× 104 個(gè)細胞 /cm2） 20 ml 在 75 cm2 的培養瓶中培養。
2. 約 3.5 天后，細胞處于對數生長(cháng)期時(shí)，將 0.2 ml 的 1×10-5 mol/L 的秋水仙酰胺（用 D-PBSA 配制）加入培養瓶?jì)纫延械呐囵B基中，終濃度 1×10-7 mol/L 。
3. 4~6 小時(shí)后，輕輕去掉培養基，加 5 ml 0.25% 胰蛋白酶，孵育 10 min。
4. 在胰蛋白酶液中離心細胞，棄掉上清胰蛋白酶。
5. 以 5 ml 低滲溶液（0.04 mol/L KCl ; 0.025 mol/L 枸櫞酸鈉）重新混懸細胞，37℃ 下靜置 20 min 。
6. 加入等量新鮮配制的冰冷的醋酸甲醇（一份冰醋酸加三份無(wú)水甲醇或乙醇，新鮮配置并在冰上保存），不停地混合，然后以 100 g 速度離心 2 min。
7. 棄掉上清混合物，在渦流混懸器上震蕩細胞團塊，再慢慢邊混勻邊加新制備的醋酸甲醇。
8. 細胞在冰上靜置 10 min。
9. 以 100 g 速度離心細胞 2 min 。
10. 棄掉上清醋酸甲醇，以 0.2 ml 的醋酸甲醇溶液，重新振蕩混懸細胞團，直到細胞均勻分散。
11. 用吸管吸一滴細胞懸液到吸管尖部，從約 12 英寸（30 cm） 處滴到?jīng)龅牟Ｆ?，傾斜玻片，讓液滴流下并鋪開(kāi)。
12. 將玻片在燒杯沸水上迅速干燥，然后用相差顯微鏡觀(guān)察。如果細胞均勻鋪展而沒(méi)有相互接觸，則以同樣濃度的細胞制備更多片子。如果細胞成堆重疊出現，則稀釋?xiě)乙?2~4 倍之后，再制備一張滴液玻片。如果滿(mǎn)意，就制備更多片子，若不滿(mǎn)意，重復這一步驟進(jìn)一步稀釋。
13. 進(jìn)行 Giemsa 細胞染色：
(a)將玻片放在架子上，架子放在水池上。
(b)以數滴純 Giemsa 染液完-全覆蓋玻片，染色 2 min 。
(c)以約 10 倍體積的水淹沒(méi)玻片。
(d)再靜置 2 min。
(e)用流動(dòng)水沖掉稀釋過(guò)的染液。
(f) 最后用水逐張沖洗玻片去除染液沉淀。
(g)顯微鏡下觀(guān)察染色情況，如果滿(mǎn)意，則將載玻片徹-底干燥，用#00蓋玻片及 DPX 或 Pennoum 封片。注意事項
必須倒掉染色液，因為氧化的染色液浮渣會(huì )留在玻片上。即使在平皿中染色，染液也不能倒掉，而必須用水從下向上置換掉。
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安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù)，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)
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