葡萄糖和L-谷氨酰胺在培養基中濃度


葡萄糖在生物學(xué)領(lǐng)域具有重要地位,是活細胞的能量來(lái)源和新陳代謝中間產(chǎn)物,為生物的主要供能物質(zhì),所以在培養細胞中,一般的細胞都會(huì )選擇高糖的培養基來(lái)促進(jìn)細胞體外生長(cháng)。
在目前常用的培養基中,葡萄糖和谷胺酰胺是體外培養動(dòng)物細胞的主要能源,其能量代謝通路與體內完-全不同,表現為葡萄糖主要經(jīng)糖酵解途徑為細胞提供能量,谷胺酰胺大部分通過(guò)不完-全氧化途徑,另一小部分通過(guò)完-全氧化為細胞供能。因此,他們能調整細胞內的代謝途徑,促進(jìn)細胞的快速生長(cháng)和產(chǎn)物合成,同時(shí)可減少代謝抑制物的生成。
L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解,它的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性GlutaMAX-I 二肽是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完-全降解。
葡萄糖主要通過(guò)糖酵解和檸檬酸循環(huán)兩個(gè)酶系結構共同分解葡萄糖提供生理活動(dòng)所需要的能量和細胞結構組成的小分子,并且能夠在組織細胞內起到維持滲透壓的作用,如果葡萄糖過(guò)多,那么會(huì )通過(guò)不同過(guò)程變成脂肪或蛋白質(zhì)。
葡萄糖和L-谷氨酰胺在培養基中濃度
谷氨酰胺在細胞代謝過(guò)程中起重要作用,合成培養基中都要添加,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定容易降解,4℃下放置7天即可分解約50%,所以都是在使用前添加。配制好的培養液(含谷氨酰胺)在4℃放置2周以上時(shí),要重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺,故需單獨配制谷氨酰胺,以便臨時(shí)加入培養液內。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L。一般配制為100倍濃縮液,即濃度為200mmol/L(29.22g/L),配制時(shí)應加溫30℃,完-全溶解后過(guò)濾除菌,分裝至小瓶,儲存于-20℃。使用時(shí),在每100ml培養液中加入0.5~2ml谷氨酰胺濃縮液,終濃度為1~4mmol/L即可。
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