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    細胞活性測定方法大全

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-10  點(diǎn)擊次數: 1294次

    代謝增殖測定



    MTT檢測法

    活細胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶,能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚(Formazan),并沉積在細胞中,死細胞則無(wú)此現象。接著(zhù)用二甲基亞砜(DMSO)溶解沉積在細胞中的甲瓚后,可利用酶標儀490nm波長(cháng)測光吸收值,依據吸光值(OD值)計算出活細胞數量。在一定細胞數范圍內,吸光值與細胞活性成正比。

    △ 圖例



    XTT檢測法

    與MTT原理相似,皆是利用添加物與活細胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶反應,并利用酶標儀測定產(chǎn)物光吸收值;不同于MTT法的是,XTT法還原產(chǎn)物是水溶性的橙黃色甲肷,不需經(jīng)過(guò)二甲基亞砜(DMSO)溶解步驟,即可直接測定光吸收值,操作較MTT方便快速。當XTT與電子耦合劑作用后產(chǎn)生的水溶性甲肷吸光值與活細胞數成正比。

    △ 圖例



    DNA合成增殖實(shí)驗


    BrdU檢測法

    BrdU為胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于標記活細胞中新合成的DNA(細胞活性周期S期),BrdU可隨著(zhù)DNA復制進(jìn)入子細胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的細胞DNA都會(huì )帶有BrdU標記,可通過(guò)抗BrdU單克隆抗體檢測,借此檢測細胞的增殖能力,但BrdU單克隆抗體檢測過(guò)程需要將部分DNA變性,使部分雙股解開(kāi)成單股才能順利檢測。且BrdU為光敏性,因此需要在光線(xiàn)刺激較低(黑暗)的環(huán)境下操作,并避光培養。

    △ 圖例



    EdU檢測法

    EdU原理跟BrdU檢測法很像,都是代替胸腺嘧啶(Thymine,T)滲入正在復制的DNA中,并加入能與EdU反應的熒光染料,即可利用檢測熒光值偵測細胞增殖,或在細胞組織級別作為標記追蹤等研究,實(shí)驗過(guò)程不需要經(jīng)過(guò)BrdU檢測法的DNA變性處理。

    △ 圖例


    化學(xué)發(fā)光細胞活性測定


    ATP發(fā)光法

    ATP是細胞的能量直接來(lái)源,ATP發(fā)光法是通過(guò)檢測細胞內ATP含量來(lái)分析細胞增殖。市面上的原理是利用外源的螢火蟲(chóng)熒光素(Luciferin)與熒光素酶(Luciferase),以細胞內含的ATP為能量來(lái)源,發(fā)生氧化反應產(chǎn)生生物冷光,因此可通過(guò)監測冷光光度,來(lái)對應ATP含量并判斷細胞增殖狀況。

    △ 圖例



    熒光染料增殖實(shí)驗


    CFSE檢測法

    CFSE是一種可穿透細胞膜的熒光染料,具有細胞膜通透性,能夠自由進(jìn)入細胞;當CFSE擴散穿過(guò)細胞膜,會(huì )與細胞內源酯酶產(chǎn)生水解反應而被激發(fā),發(fā)出綠色熒光,這些帶熒光的CFSE會(huì )進(jìn)一步與細胞骨架蛋白結合,形成穩定的胞內熒光蛋白。每當細胞進(jìn)行分裂增殖,胞內熒光蛋白會(huì )被平均分配到下一代細胞中,因此細胞熒光強度會(huì )隨著(zhù)增殖代數增加而不斷地降低,可用流式細胞儀進(jìn)一步檢測分析得出細胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度,對于最終判斷細胞增殖結果有直接性的影響。

    △ 圖例



    臺盼藍細胞計數


    臺盼藍(Trypan Blue)計數法

    臺盼藍是一種藍色細胞活性染料,無(wú)法通過(guò)結構完整的細胞膜進(jìn)入細胞內部;但細胞死后,喪失細胞膜穩定性,臺盼藍會(huì )進(jìn)入細胞將細胞染成藍色,因此在細胞實(shí)驗中,常規地搭配自動(dòng)細胞計數儀或血球計數板,應用于分辨活細胞和死細胞、及檢測細胞膜的完整性。

    △ 圖例



    Orangu™細胞計數


    Orangu™計數法

    Orangu™ solution是一種無(wú)細胞毒性、高靈敏度、比色法,用于測定細胞增殖和細胞毒性的細胞活性試劑。利用WST-8(細胞代謝的一種水溶性的四唑鹽)在細胞內線(xiàn)粒體脫氫酶作為電子介質(zhì)的情況下,它被還原為橙色的甲瓚染料,且產(chǎn)生甲瓚染料的數量與活細胞的數量和培養時(shí)間成正比。操作簡(jiǎn)單快速,結果可重復。

    △ 圖例



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