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    細胞復蘇

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-11  點(diǎn)擊次數: 688次

    簡(jiǎn)介

    細胞復蘇是將凍存在液氮中的細胞解凍之后重新培養,細胞恢復生長(cháng)的過(guò)程。

    材料與儀器

    器材:37℃ 水浴箱、離心機、無(wú)菌試管以及培養瓶。
     
    試劑:
     
    ① 含 20% 血清 RPMI 1640 培養液;

     

    步驟

    細胞復蘇的基本過(guò)程可分為如下幾步:
     
    A 從液氮中取出細胞安瓿或凍存管,置 37℃ 水浴中迅速融化,一旦冰塊消失即將凍存管從水浴中取出。
     
    B 用 70% 乙醇擦洗凍存管外部以減少污染機會(huì )。
     
    C 吸取凍存管內容物緩慢加入含 4-5 ml 培養液的 T-25 細胞培養瓶中,置 5%CO2、37℃ 細胞培養箱培養,次日換液。也可通過(guò)離心去除細胞保護劑,再進(jìn)行細胞培養。

     

    注意事項

    凍存細胞并非能達到 100% 復蘇成功。復蘇失敗可能與以下因素有關(guān),凍存時(shí)細胞數量少或生長(cháng)狀態(tài)不良;細胞受細菌或支原體污染;液氮罐保管不善;復蘇時(shí)培養條件改變,如將胎牛血清換成小牛血清;復蘇方法不得當等。


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