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免疫細胞傳代后多久適合進(jìn)行轉染？
發(fā)布時(shí)間： 2023-02-06 點(diǎn)擊次數： 783次理想免疫細胞轉染方法應具有效率高、細胞毒性小、重復性好、安全、簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導的轉染技術(shù)是目前轉染效率高的方法，同時(shí)具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類(lèi)型有很強的選擇性，在一般實(shí)驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導的轉染方法，則各有其特點(diǎn)。常見(jiàn)實(shí)驗室細胞傳代方法有貼壁細胞用消化法傳代和懸浮生長(cháng)的細胞采用離心分離后傳代。貼壁細胞消化時(shí)，因細胞對胰酶的敏感程度不同，所以消化時(shí)間差別較大。對于初學(xué)者，消化程度也很難掌握好，加入適量胰酶，輕輕搖晃3-4次（使細胞充分與胰酶接觸），隨即吸取胰酶，放于培養箱消化，數分鐘后取出，輕拍培養瓶，見(jiàn)細胞自瓶壁滑下即可，若沒(méi)有則繼續消化。細胞轉染是指取對數生長(cháng)的細胞，接種于培養板，加培養液，培養過(guò)夜（細胞長(cháng)至85-90%滿(mǎn)）；按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉染實(shí)驗。轉染時(shí)應注意預備脂質(zhì)體/DNA混合物必須在無(wú)血清下進(jìn)行。在轉染之前更換培養基，可提高轉染效率，但所用培養基必須37℃預溫。脂質(zhì)體/DNA混合物應當逐滴加入，盡可能保持一致，從培養皿一邊到另一邊，邊加入邊輕搖培養皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。對于細胞轉染，一般在細胞中期轉染，轉染效率會(huì )相對高一些。這個(gè)時(shí)候的細胞狀態(tài)是的。對于轉染的佳時(shí)間是在傳代后24hr以?xún)?。轉染后48hr，外源基因肯定是有表達的。至于72hr，應該也還是有表達的，可能表達量會(huì )很低，主要是這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細胞大部分都衰老了。建議293T收集細胞，在轉染后36-48hr收集。
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