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免疫組織化染色
發(fā)布時(shí)間: 2023-04-10 點(diǎn)擊次數: 589次材料與儀器
新鮮組織
二甲苯 酒精 H2O2 抗原修復液 枸櫞酸鈉緩沖液 石蠟 福爾馬林 PBS DAB 蘇木素 樹(shù)膠 丙酮 打孔液 檸檬酸鈉 APES
恒溫搖床 高壓鍋 塑料切片架 耐溫玻璃容器 -80℃冰箱 恒冷冰凍切片機 載玻片步驟
一.石蠟切片免疫組化染色實(shí)驗步驟:1.石蠟切片脫蠟至水:(石蠟切片染色前應置60℃ 1 小時(shí))。(1)二甲苯I、II,各10 分鐘。(2)梯度酒精:100%,2 分鐘® 95%,2 分鐘® 80%,2 分鐘® 70%2 分鐘。(3)蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床)。2.過(guò)氧化氫封閉內源性過(guò)氧化物酶:3%H2O2,室溫10 分鐘(避光)。3.蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床)。4.抗原修復:根據待檢測的抗原,選擇適當的方法。附:抗原修復液(10mM pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液)的配制(1)儲備液的配制:A 液:枸櫞酸三鈉-2H2O 29.41g + 蒸餾水1000mlB 液:枸櫞酸21g + 蒸餾水1000ml(2)工作液的配制:A 液82ml + B 液18ml + 蒸餾水900ml抗原修復的方法:(1)高壓鍋處理技術(shù):枸櫞酸鈉緩沖液(10mM,PH6.0),淹沒(méi)切片,蓋上鍋蓋,高壓鍋內煮沸,上汽3 分鐘后緩慢冷卻(可用自來(lái)水在高壓鍋外沖,以助冷卻)。(2)微波處理技術(shù):用塑料切片架,置于塑料或耐溫玻璃容器內,枸櫞酸鈉緩沖液淹沒(méi)切片,選擇中高或高檔,5 分鐘;取出并補充已預熱的枸櫞酸鈉緩沖液;再選擇中高或高檔,5 分鐘(. 最佳溫度為92~95℃)(3)酶消化處理:此略。抗原修復的注意事項:(1)組織不能干。(2)選擇抗原修復方法要因抗體而異。(3)該方法主要用于10%福爾馬林固定、石蠟包埋組織。(4)抗原修復后至DAB 顯色的過(guò)程中,均需用PBS 緩沖液。5.PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床)。6.正常血清封閉:從染片缸中取出切片,擦凈切片背面水分及切片正面組織周?chē)乃郑ū3纸M織呈濕潤狀態(tài)),滴加正常山羊或兔血清(與第二抗體同源動(dòng)物血清)處理,37℃,15 分鐘。
深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷(xiāo)售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗室耗材銷(xiāo)售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專(zhuān)業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線(xiàn),在各個(gè)領(lǐng)域內向用戶(hù)提供世界前沿水平和質(zhì)量穩定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。
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