簡(jiǎn)介：
細胞遷移(Cell migration)：因其類(lèi)似體外傷口愈合過(guò)程，又名傷口愈合實(shí)驗(Wound healing assay)，是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)?？捎糜诳梢杂^(guān)察藥物、基因等外源因素對細胞遷移、修復和相互作用的影響。
 

原理：
在融合的單層細胞上人為制造一個(gè)空白區域，稱(chēng)為“劃痕/傷口"，劃痕邊緣的細胞會(huì )逐漸進(jìn)入空白區域使“劃痕/傷口"愈合，于細胞遷移過(guò)程中在開(kāi)始和定期捕獲圖像，通過(guò)測量不同時(shí)間點(diǎn)的劃痕間距并計算差值，可對細胞的遷移能力做出判斷。

材料及儀器：
耗材：六孔板、馬克筆、直尺、200ul槍頭、PBS、（血清）細胞培養基等。

實(shí)驗步驟：

1.劃線(xiàn)：于六孔板底面，馬克筆順直尺畫(huà)三條橫線(xiàn)作為標記線(xiàn)。

2.種板：根據分組種板，細胞密度為5x105個(gè)/孔左右。并務(wù)必鋪勻。

3.劃痕：待細胞長(cháng)滿(mǎn)后，用直尺比著(zhù)，200ul槍頭垂直于孔板和畫(huà)的標記線(xiàn)劃兩條垂線(xiàn)，使劃痕與標記線(xiàn)相交，可以形成若干交叉點(diǎn)，作為固定的檢測點(diǎn)。

4.清洗：棄去舊培養基，用PBS輕輕潤洗兩到三次，直到劃下來(lái)的細胞沖洗干凈。

5.加液：根據分組分別加入加藥培養基或無(wú)血清培養基。

6.拍照觀(guān)察：劃痕、清洗、加液完成后，用顯微鏡拍不同倍數的照片，作為0h對照。放入37℃，5%CO2培養箱中培養。在所需時(shí)間點(diǎn)取出細胞，于顯微鏡下觀(guān)察同一位置劃痕寬度并拍照。

7.數據分析：一種是統計細胞遷移的距離，一種是統計劃痕面積。都可以用ImageJ軟件來(lái)進(jìn)行分析。

注意事項或經(jīng)驗分享：

1.直尺和馬克筆等工具用前務(wù)必照紫外消殺。
2.種板所用細胞數目可根據細胞的生長(cháng)快慢調整接種數量。保證每組細胞鋪板密度一致，保證每孔務(wù)必鋪勻。
3.提前用馬克筆畫(huà)好線(xiàn)，避免細胞種板后不好操作。槍頭畫(huà)線(xiàn)之前，不要棄去原培養基，否則劃下來(lái)的細胞團塊會(huì )堆積在劃痕邊緣上堆積導致寬度不統一。
4.用槍頭畫(huà)線(xiàn)時(shí)，要用力均勻一致，垂直穩定一氣呵成，避免寬度差別較大不利于結果分析的準確性。
5.根據交叉點(diǎn)定位拍照，避免了前后觀(guān)察時(shí)位置不固定的問(wèn)題，結果更有說(shuō)服力。
6.務(wù)必清洗干凈劃下來(lái)的活細胞，避免在拍照期間細胞貼壁在劃痕處并進(jìn)行增殖影響結果。
7.0h拍照時(shí)可以在試驗記錄本上標記拍照位置，以便下各時(shí)間段拍攝同一位置。
8.拍照時(shí)注意不要露出馬克筆畫(huà)的線(xiàn)條，不要鏡頭過(guò)于模糊，盡量不要選擇邊緣的光影差別過(guò)大的位置，切換鏡頭時(shí)不要忘記換標尺，否則都會(huì )影響結果的自動(dòng)分析。
9.根據細胞種類(lèi)，選擇無(wú)血清或低血清培養基來(lái)降低細胞增殖的影響，或用Mitomycin（1μg/ml）處理1h，抑制細胞的分裂，消除增殖的影響。但同時(shí)也會(huì )影響細胞遷移的速度。
10.一般拍照時(shí)間為0，2，4，6，8，10，12，16，24小時(shí)等選取，不建議超過(guò)24h，過(guò)度增殖造成實(shí)驗假陽(yáng)性結果。
11.手工劃痕可能難以保證寬度一致性，culture Insert是現在市面上也推出的一種可以提前占據劃痕區域的模具，將細胞接種于Dish中間的Insert培養，細胞長(cháng)滿(mǎn)Insert區域后用鑷子移除Insert產(chǎn)生筆直且無(wú)細胞損傷的劃痕。
12.分析結果中長(cháng)度法，由于細胞遷移并不是齊頭并進(jìn)的，可能組間差異大，建議用平均多條距離的值來(lái)代表。

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