背景介紹

Caco2細胞是常見(jiàn)的結腸腺癌細胞，正常情況下，Caco2細胞在培養的過(guò)程中貼壁生長(cháng)，其形狀多為多邊形或梭形，增殖速度較快，其鏡下形態(tài)如下圖所示，密度已大于90%?？梢赃M(jìn)行傳代。

培養方法：

1.培養基配置：DMEM高糖培養基 + 10%胎牛血清 + 1%青霉素鏈霉素雙抗 + 1%谷氨酰胺。

2.其余需要準備的試劑耗材包括：無(wú)菌PBS、腺酶、無(wú)菌槍頭、細胞培養皿、15ml離心管、離心機、生物安全柜、水浴鍋、75%酒精。

3.培養條件：37°C、5%CO2的細胞培養箱；

4.細胞復蘇：提前將水浴鍋溫度調至37°C，從液氮罐中拿出細胞，迅速放在37°C水浴鍋中輕輕晃動(dòng)，使細胞快速融化，融化后用移液器輕輕混勻，將其轉移到15ml離心管內，加入1-2ml培養基，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養基重懸10次左右，將其全部加入6cm細胞培養皿內（提前加入4-6ml培養基），十字混勻后放入細胞培養箱中，24h觀(guān)察細胞密度進(jìn)行后續操作。

5.細胞傳代：當細胞密度≥90%時(shí)，進(jìn)行細胞傳代，吸掉原有培養基，沿培養皿邊緣加入1ml PBS清洗，吸掉PBS后加入750μl含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間2min左右，消化完成后加入1.5ml培養基中止消化，用移液槍吹打，保證細胞全部被吹下，將混合液全部轉移到離心管中，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養基充分重懸，取333μl加入有4ml培養基的6cm細胞培養皿中，十字混勻后放入細胞培養箱內，1-3天后根據細胞密度換液或傳代。

6.細胞凍存：前述收集細胞沉淀，加入1ml凍存液（培養基：FBS：DMSO=7：2：1）充分重懸，將混合液移入凍存管內，標記好基本信息，將凍存管入凍存盒后放入-80℃冰箱，24h后可將凍存管放入-80℃冰箱細胞盒內。

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