siRNA轉原代肌腱細胞轉染試劑

一、產(chǎn)品說(shuō)明：

1、產(chǎn)品名稱(chēng)

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、品牌

ZETA LIFE

2、包裝規格

貨號：AD600075

規格：0.75ml

3、儲存條件

常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復凍融。

二、使用說(shuō)明：

1、材料準備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水；②無(wú)內毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉染。

核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉染 24 小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液，懸浮細胞轉染過(guò)程中不用換液。

分析結果：質(zhì)粒 DNA 轉染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉染效率，48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉染后 9 小時(shí)熒光檢測轉染效率，48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。

三、注意事項：

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉染效率會(huì )下降 80%左右，甚至會(huì )轉染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內毒素，內毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性，會(huì )導致轉染效率下降 70%-80%左 右，甚至導致轉染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。

3、復合物的制備過(guò)程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進(jìn)行稀釋?zhuān)恍鑼⒑怂岷娃D染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進(jìn)行了稀釋會(huì )導致轉染失。

4、轉染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養板。

5、轉染 24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉染 4-6 小時(shí)后換液。

6、原代細胞、免疫細胞轉染時(shí)，細胞基礎培養基里面不能含有雙抗培養基。

四、各品牌轉染試劑類(lèi)型與Zeta Life轉染試劑的差異比較：

1、Thermo品牌Lipo 2000采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體，需要更換培養基；特點(diǎn)是毒性大；轉染前后需要更換培養基；可以轉染質(zhì)粒DNA、siRNA（效果差）。

2、Thermo品牌Lipo 3000采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體，需要更換培養基；特點(diǎn)是相比Lipo 2000毒性略??；轉染前后需要更換培養基；可以轉染質(zhì)粒DNA、siRNA（效果較差）。

3、Thermo品牌RNAiMAX采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體，需要更換培養基；特點(diǎn)是專(zhuān)門(mén)用來(lái)轉RNA，對于細胞系的轉染效率一般，對干細胞和神經(jīng)原代細胞轉染效果差。

4、Promega品牌FuGENE 6采用脂質(zhì)混合體、特定緩沖液，需要更換培養基；特點(diǎn)是本質(zhì)還是脂質(zhì)體；只能轉DNA；含有微量動(dòng)物源成分，適用細胞種類(lèi)因此受限；轉染前后需要更換培養基；親塑性，轉染效率會(huì )因使用PE管（塑料管）而大打折扣。

5、Roche品牌FuGENE HD采用脂質(zhì)混合體、特定緩沖液，需要更換培養基；特點(diǎn)是本質(zhì)還是脂質(zhì)體；只能轉DNA；親塑性，轉染效率會(huì )因使用PE管（塑料管）而大打折扣。

6、Zeta Life品牌Advanced系列采用新型工業(yè)材料，不需要更換培養基；特點(diǎn)是不需要換液，無(wú)細胞毒性，轉染效率高，適用細胞種類(lèi)多，可轉染質(zhì)粒DNA、siRNA及小動(dòng)物活體轉染。

siRNA轉原代肌腱細胞轉染試劑各規格：

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600025        0.25ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600050        0.5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600075        0.75ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600150        1.5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD600500        5ml

品牌：美國Zeta Life        貨號：AD601000        10ml