原代細胞質(zhì)粒轉染試劑

一、產(chǎn)品詳情：

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區聯(lián)合開(kāi)發(fā)用于哺乳動(dòng)物細胞、活體動(dòng)物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑，此技術(shù)成為新的全球蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。Zeta Life轉染試劑可轉染極度難轉染的免疫細胞、懸浮細胞，如:T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等；可高效率轉染siRNA到任何哺乳動(dòng)物細胞;用于將 DNA 和 siRNA 轉染到真核細胞系和各種原代細胞中；轉染細胞后可10小時(shí)內快速代謝的第三代新轉染試劑。

二、使用說(shuō)明：

1、材料準備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水；②無(wú)內毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉染。

核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉染 24 小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液，懸浮細胞轉染過(guò)程中不用換液。

分析結果：質(zhì)粒 DNA 轉染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉染效率，48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉染后 9 小時(shí)熒光檢測轉染效率，48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。

原代細胞質(zhì)粒轉染試劑

三、注意事項：

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉染效率會(huì )下降 80%左右，甚至會(huì )轉染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內毒素，內毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性，會(huì )導致轉染效率下降 70%-80%左 右，甚至導致轉染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。

3、復合物的制備過(guò)程中是絕不能用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進(jìn)行稀釋?zhuān)恍鑼⒑怂岷娃D染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進(jìn)行了稀釋會(huì )導致轉染失。

4、轉染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養板。

5、轉染 24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉染 4-6 小時(shí)后換液。

6、原代細胞、免疫細胞轉染時(shí)，細胞基礎培養基里面不能含有雙抗培養基。

四、產(chǎn)品說(shuō)明：

1、產(chǎn)品名稱(chēng)

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規格

貨號：AD600025 、AD600050、AD600075、AD600150

規格：0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3、儲存條件

常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復凍融。

深圳市安培生物科技有限公司是美國 Zeta Life 公司的中國代理商。Advanced DNA RNA轉染試劑大量現貨，均經(jīng)過(guò)反復充分驗證，轉染效果好且重復性佳，提供完整售后服務(wù)和技術(shù)支持。尊敬的客戶(hù)您如在訂購過(guò)程中遇到任何問(wèn)題都可以與我司客戶(hù)經(jīng)理聯(lián)系尋求幫助。