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轉染HGF-1牙齦成纖維細胞, 質(zhì)粒大小10646bp
發(fā)布時(shí)間: 2021-07-05 點(diǎn)擊次數: 932次1.可轉染極度難轉染的免疫細胞,懸浮細胞,如T細胞,NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等;
2.可高效率轉染sirRNA、小分子到任何哺乳動(dòng)物細胞;
3.轉染細胞后可10小時(shí)內快速代謝的第三代新轉染試劑;
轉染條件:
細胞密度:60左右
質(zhì)粒DNA濃度:648ng/ul
質(zhì)粒DNA大?。?0646bp
培養板:6孔板
轉染試劑用量:8ul
質(zhì)粒DNA用量:電訊
轉染試劑:AD600150,Advanced DNA RNA轉染試劑
轉染時(shí)間:48小時(shí)
血清:z7010-500 胎牛血清
細胞凍存:CE70100T無(wú)血清細胞凍存液
細胞活力檢測:K009-500,cck8
重要指導方針:
-質(zhì)粒DNA必須溶解在ddH 2 O中。如果溶解在Buffer中,轉染效率會(huì )下降70%,甚至導致轉染失敗。
-質(zhì)粒DNA必須去內毒素,否則轉染效率會(huì )下降70%,甚至導致轉染失敗。
- 在制備轉染復合物時(shí),不能使用其他試劑稀釋核酸或轉染試劑。只需將核酸和轉染試劑按照1:1的關(guān)系直接混合即可。否則,轉染效率將下降80%,甚至導致轉染失敗。
-檢查并與轉染試劑混合后,用移液管吹吸10-15次以充分混合,確保管壁無(wú)液體殘留。
- 將核酸與轉染試劑混合并在室溫下孵育至少 10-15 分鐘。
- 將復合物加入細胞培養板并輕輕混勻,將板置于 CO 2 培養箱中繼續培養。
- 在整個(gè)轉染實(shí)驗過(guò)程中,細胞可以在*培養基中培養,而不是使用無(wú)血清培養基。
- 如果轉染后顯微鏡下觀(guān)察到白色或黑色圓形顆粒,則為轉染試劑的新材料顆粒。
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