果凍晶瑩剔透，口感 QQ 的，其實(shí)果凍的原料瓊脂糖，也是我們平時(shí)用來(lái)跑電泳的材料，瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗常用以 DNA 切膠回收，DNA 分離和用于佐證 DNA 是否重組、質(zhì)粒等是否切開(kāi)。今天我們就來(lái)聊聊瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗的一些小技巧小細節。

第一步：膠液的制備 

稱(chēng)取 0.4g 瓊脂糖，置于 200ml 錐形瓶中，加入 50ml 0.5×TBE 稀釋緩沖液，放入微波爐里加熱，直到瓊脂糖全部熔化，取出搖勻，此為 0.8%瓊脂糖凝膠液?？傄后w量不宜超過(guò)錐瓶的 50%容量。否則會(huì )溢出來(lái)的。還要擦洗微波爐。加熱過(guò)程中要不時(shí)搖動(dòng)，使附于瓶壁上的瓊脂糖顆粒進(jìn)入溶液。加熱時(shí)應蓋上封口膜，以減少水份蒸發(fā)。

第二步：膠板的制備 

倒膠時(shí)的溫度不可太低，否則凝固不均勻。東一塊西一塊的。果凍做出來(lái)就不好看啦。速度也不可太快，否則容易出現氣泡。果凍做出來(lái)里面都是氣泡。怎么吃呀？待膠*凝固后撥出梳子，注意不要損傷梳底部的凝膠。

第三步：加樣 

注意上樣時(shí)要小心操作，避免損壞凝膠或將樣品槽底部凝膠刺穿。果凍下面被戳個(gè)窟窿，還怎么吃呀？

第四步：電泳 

加完樣后，合上電泳槽蓋，立即接通電源?？刂齐妷罕３衷?60-80V，電流在 40mA 以上。當溴酚藍條帶移動(dòng)到距凝膠前沿約 2cm 時(shí)，停止電泳。

第五步：染色 

未加 EB 的膠板在電泳完畢后移入 0.5μg/ml 的 EB 溶液中，室溫下染色 20-25 分鐘。

第六步：觀(guān)察和拍照 

在波長(cháng)為 254nm 的長(cháng)波長(cháng)紫外燈下觀(guān)察染色后的或已加有 EB 的電泳膠板。DNA 存在處顯示 出肉眼可辨的桔紅色熒光條帶。紫光燈下觀(guān)察時(shí)應戴上防護眼鏡或有機玻璃面罩，以免損傷眼睛。

除這些細節之外，還有一些注意事項： 

1、酶切時(shí)所加的 DNA 溶液體積不能太大，否則 DNA 溶液中其他成分會(huì )干擾酶反應。 

2、酶活力通常用酶單位（U）表示，酶單位的定義是：在最適反應條件下，1 小時(shí)*降解 1 mg λDNA 的酶量為一個(gè)單位，但是許多實(shí)驗制備的 DNA 不象 λDNA 那樣易于降解，需適當增加酶的使用量。反應液中加入過(guò)量的酶是不合適的，除考慮成本外，酶液中的微量雜質(zhì) 可能干擾隨后的反應。 

3、市場(chǎng)銷(xiāo)售的酶一般濃度很大，為了省著(zhù)點(diǎn)兒花，使用時(shí)可事先用酶反應緩沖液進(jìn)行稀釋。 另外，酶通常保存在 50%的甘油中，實(shí)驗中，應將反應液中甘油濃度控制在 10%以下，否則，酶活性將受影響。 

4、觀(guān)察 DNA 離不開(kāi)紫外透射儀，可是紫外光對 DNA 分子有切割作用。從膠上回收 DNA 時(shí)， 應盡量縮短光照時(shí)間并采用長(cháng)波長(cháng)紫外燈(300-360nm），以減少紫外光切割 DNA。

5、EB 是強誘變劑，還有中等毒性，就是有致癌性。配制和使用時(shí)都要戴好手套。盡量不要把 EB 灑到桌面或地面上。如果真的不幸灑到桌面或地面上了，凡是沾污了 EB 的容器或物品必須經(jīng)專(zhuān)門(mén)處理后才能清洗或丟棄。

6、當 EB 放太多了，膠染色過(guò)深，DNA 帶看不清的時(shí)候，可將膠放入蒸餾水沖泡，30 分鐘后再觀(guān)察。 

以上，安培君介紹了做果凍，啊，不！做瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗的一些小技巧小竅門(mén)，也希望大家伙兒做出好吃的“果凍"來(lái)。