酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗，簡(jiǎn)稱(chēng)為 ELISA。ELISA 實(shí)驗是一種非常經(jīng)典的免疫學(xué)實(shí)驗。雖然歷史非常悠久了，但是還是不斷地在臨床和基礎研究中得到應用。其主要用于：免疫酶染色各種細胞內成份的定位；研究抗酶抗體的合成；顯現微量的免疫沉淀反應；定量檢測體液中抗原或者抗體成份。小編總結了一些經(jīng)驗教訓。遇到的問(wèn)題，可能的原因，解決方法。供大家參考。

問(wèn)題 1：陽(yáng)性與陰性不能達到 2.1 的比值，陰性顏色太深。

可能的原因：陰性對照（也就是陽(yáng)性對照的除目標抗原外的其它成分）中有某種成分與一抗作用。

解決的方法：純化抗原除去干擾成分。

問(wèn)題 2：陽(yáng)性與陰性不能達到 2.1 的比值，陽(yáng)性顏色太淺。

可能的原因有 3 個(gè)： 1）一抗效價(jià)不好。 2）抗原太稀。 3）封閉時(shí)間過(guò)長(cháng)。

解決的方法： 1）換用一抗或增加一抗用量。 2）增加抗原濃度。 3）縮短封閉時(shí)間，封閉時(shí)間一般 37 攝氏度 3 個(gè)小時(shí)，或者 4 攝氏度過(guò)夜。不能比這個(gè)更長(cháng)了。

問(wèn)題 3：增加抗原濃度，一抗濃度不變，顯色反應沒(méi)有表現出應有的梯度。

可能的問(wèn)題： 一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和。

解決的方法： 增加一抗用量; 或在一抗用量不變的情況下減少抗原濃度做梯度。

問(wèn)題 4：增加一抗濃度，顯色反應沒(méi)有表現出應有的梯度。

可能的原因：一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和。

解決的方法：增加抗原用量；或在抗原用量不變的情況下減少一抗濃度做梯度。

問(wèn)題 5：加完 TMB 顯色后顏色梯度很明顯，但加了硫酸終止反應后顏色梯度沒(méi)有那么明顯了。

可能的原因：硫酸可能把其它成分都炭化了。

解決的辦法：加少一點(diǎn)硫酸，參考值：50 μlTMB+35 μl 硫酸；或者采用 1M 的 HCL 作為終止液，50ulTMB+50ul1M HCL。

這些步驟里面，一抗和封閉是兩個(gè)關(guān)鍵。如果 ELISA 做不出滿(mǎn)意的結果，首先應該從這兩個(gè)方面改進(jìn)。Elisa 實(shí)驗看似簡(jiǎn)單，其實(shí)不然。別小瞧了ELISA。光是一個(gè)加樣就有很多講究。

ELISA 中加樣須注意如下問(wèn)題：

吸取樣品時(shí)，加樣槍吸頭不應黏附多余的液體；加樣時(shí)不可 90 度向孔中滴加液體，這樣會(huì )導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確！ 不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會(huì )將孔中的液體吹起來(lái)，加樣不準確！ 正確的加樣方法應為 45 度，吸頭貼著(zhù)孔壁加入，應注意： 角度太小，會(huì )使液體殘留在孔壁上，導致加樣不準確！ 吸頭應當貼著(zhù)管壁和液面的交界處！

綜上所述，Elisa 實(shí)驗看似簡(jiǎn)單，其實(shí)還是有很多細節需要我們注意的。以上介紹了 Elisa 實(shí)驗的一些經(jīng)驗教訓，希望對大家有所幫助。