這篇文章Kaustubh Kishor Jadhav撰寫(xiě)的，今天接著(zhù)把續集寫(xiě)完，劃重點(diǎn)，續集真的很重要，因為都是滿(mǎn)滿(mǎn)告訴您怎么對付和清除支原體的干貨。

避免支原體感染的最好和最重要的方法是為實(shí)驗室工作人員提供適當的培訓和指導。這可以通過(guò)培訓合格的員工進(jìn)行細胞培養，從而消除污染的原因之一。如果可能的話(huà)，應該為細胞培養和細胞系的維持提供一個(gè)單獨的實(shí)驗室。為實(shí)驗室提供這樣的環(huán)境不僅可以減少支原體，而且可以避免其他細菌和真菌污染。

合適的個(gè)人防護用品很重要

由于人類(lèi)是污染的主要來(lái)源，預防步驟從你開(kāi)始。如果你足夠小心地為工作提供一個(gè)無(wú)菌的環(huán)境，它很快就會(huì )在你意識到之前成為一種習慣。這里有一些事情要做： 

1.在處理細胞系時(shí)，穿上干凈的實(shí)驗服和面罩。

2.避免與其他實(shí)驗室成員討論，在實(shí)驗室打噴嚏或咳嗽。人類(lèi)口腔中含有多種支原體，當你說(shuō)話(huà)、大笑、打噴嚏或咳嗽時(shí)，這些支原體會(huì )進(jìn)入細胞培養。

3.工作時(shí)戴手套，使用后丟棄。在沒(méi)有手套或口罩的情況下工作時(shí)，人與人接觸會(huì )傳播污染。一定要定期更換手套和口罩，而不是把它們放在實(shí)驗服的口袋里。

4.為實(shí)驗室準備單獨的鞋子，以避免帶入環(huán)境污染物。

細胞系和試劑

5.使用前檢查你的細胞株有無(wú)支原體污染。

6.確保用于繼代培養的血清中沒(méi)有污染。避免使用存放時(shí)間較長(cháng)的過(guò)期產(chǎn)品或試劑。

7.盡可能使用新鮮培養基和密封緊密的試劑耗材。

8.使用一次性移液管以避免交叉污染。

9.在工作之前和工作期間，確保將所有必需的設備和試劑放在層流氣流中。

10.在使用細胞系進(jìn)行化驗或分析之前，進(jìn)行支原體污染的常規檢查。

11.使用0.1微米的過(guò)濾器，因為他們是一個(gè)更好的方式避免支原體，而不是使用0.2微米的過(guò)濾器，為媒體過(guò)濾。雖然不能100分之100保證這個(gè)過(guò)程可以避免污染，但這是一個(gè)很好的預防措施。

12.準備少量用于實(shí)驗的培養基，防止其他培養基受到污染。

13.避免細胞培養物長(cháng)時(shí)間暴露在空氣中，并確保在將其放入培養箱之前擰緊瓶蓋。這也將解決通過(guò)氣溶膠污染的問(wèn)題。

14.在不使用抗生素的情況下進(jìn)行培養，因為使用抗生素會(huì )使支原體對抗生素產(chǎn)生耐藥性?？股刂荒苡糜谌コгw，不能用于防止支原體生長(cháng)。此外，長(cháng)時(shí)間使用某種抗生素會(huì )導致除支原體外的其他細菌產(chǎn)生耐藥性。

15.即使冷凍保存細胞的存活率隨著(zhù)每一次繼代培養而降低，也要始終以冷凍保存的小瓶的形式保存細胞系。

定期對層流設備和實(shí)驗室設備進(jìn)行熏蒸

用于維持細胞系的CO2培養箱不得過(guò)度擁擠（填充量不得超過(guò)其容量的60%），否則會(huì )導致支原體從一個(gè)細胞系感染到另一個(gè)細胞系。

多個(gè)細胞系不應存放在一個(gè)培養箱中，因為它會(huì )增加交叉污染的風(fēng)險。

應定期清潔CO2培養箱，避免任何形式的潮濕。為保持濕度而提供的蒸餾水應該定期更換，因為支原體、細菌和真菌可以在這些容器中居住。

立即清理所有溢出的培養基和試劑。

水浴、液氮容器、試劑瓶和其他傳染源必須定期清潔，并定期檢查是否有污染。

那么你發(fā)現了支原體污染，接下來(lái)怎么辦？最（嘬）好的方法是丟棄被感染的細胞培養瓶。在文化不可替代或非常昂貴的情況下，有一些方法可以拯救文化。

消除是一個(gè)非常耗時(shí)的過(guò)程，并增加了對其他健康細胞系的二次污染風(fēng)險。支原體清除劑（MRA）是喹諾酮類(lèi)抗生素的衍生物，是廣譜抗生素。這些試劑可以用來(lái)清洗細胞培養物。根據感染的嚴重程度，治療可能需要幾周到幾個(gè)月。漿細胞素是一種廣泛應用的藥物，可以清除培養基中存在的大多數支原體。此外，諸如BM-Cyclin、氟喹諾酮類(lèi)環(huán)丙沙星、環(huán)丙沙星、zagam、baytril、四環(huán)素等藥物可用于從感染培養物中去除支原體。

MRAs無(wú)毒，能有效去除大部分支原體污染，使用方便，對多種支原體有效。這些方法不能保證*去除支原體，但可以去除大部分支原體污染，是最后的選擇?？紤]到這種治療的持續時(shí)間會(huì )影響細胞的生長(cháng)和活力，因此存在一些缺點(diǎn)。如果支原體對細胞培養造成了永（詠）久性的損害，那是不可修復的。一些細胞可能會(huì )由于較長(cháng)的潛伏期而死亡，并影響細胞的總活力。