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細胞轉染率低,轉染試劑要全背鍋嗎?
發(fā)布時(shí)間: 2021-09-24 點(diǎn)擊次數: 1104次目前細胞轉染技術(shù)主要分為三大類(lèi):化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒(méi)有一種方法是通用并且準確無(wú)誤的,所以只有依據自己的實(shí)驗要求或者實(shí)驗探索選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實(shí)驗結果。當然也可以在前輩們發(fā)的文獻中多看看,前車(chē)之鑒可以減少很多不必要的花費。
細胞轉染低都是轉染試劑的問(wèn)題嗎?純度不夠確實(shí)會(huì )有這樣的問(wèn)題,所以選擇轉染試劑很重要,其次還需要考慮以下幾點(diǎn)影響:
1. 其他微生物污染
您覺(jué)得您養的細胞 ,不,不,不 ,可能您只知道您養的是細胞,你不知道的是您的細胞可能背著(zhù)您養了一群小三,比如支原體,病毒,黑膠蟲(chóng)等等,特別是支原體它可以更改細胞的特性,穿透細胞膜進(jìn)行基因改造,培養幾代可能看不到“它"給細胞做的整容效果,但是隨著(zhù)代次的增多,細胞就慢慢體現出來(lái)了,“它"已經(jīng)變得不是從前的那個(gè)“它"了,所以建議在轉染之前進(jìn)行一次支原體檢測,如有支原體清除干凈再轉染。
2.交叉污染:
如果同時(shí)養了很多細胞,在操作的時(shí)候沒(méi)有規范化,然后不小心讓A細胞到B細胞家里走了個(gè)親戚,最后的結果可能就是A細胞和B細胞不離不棄,若B細胞比較強悍,可能會(huì )發(fā)生鳩占鵲巢的事情。所以操作的時(shí)候一定要注意,發(fā)生不明確的交叉污染,寧可錯殺一千,不要放過(guò)一個(gè)。
3.轉染高不高,時(shí)機很重要
轉染細胞真的沒(méi)有那么容易 ,想什么時(shí)候都可以,就像不尿急,占個(gè)廁所也拉不出來(lái),相比非分裂的細胞—正在分裂的細胞往往會(huì )比靜止細胞更容易攝取并表達外源DNA,因此對大多數操作而言,細胞一般建議在轉染當天或者前一天種板,需要注意的是,鋪板細胞不宜過(guò)多,特別是瘋長(cháng)的癌細胞,因為如果細胞較多,甚至互相疊加,細胞自己都吃不飽,住不好,它也糟心的很,哪有時(shí)間和您玩轉染?
4. 抗生素和血清帶偏的轉染效果
本來(lái)想 ,能讓個(gè)細胞好好生長(cháng)不容易 ,為了防治心里覺(jué)得細胞可能產(chǎn)生的各種污染 ,于是給他們加上各種抗生素預防,比如青霉素和鏈霉素,在細胞轉染的時(shí)候,若含有這兩個(gè)組分,可增加細胞的通透性,導致轉染過(guò)低或者細胞全死亡,所以細胞它是不會(huì )說(shuō)話(huà) ,要是會(huì )說(shuō)話(huà),肯定要罵我們了 ,好好的為啥一直給他們吃各種的藥。有些轉染技術(shù)如脂質(zhì)體轉染在有血清存在的情況下效率會(huì )很低,因此轉染前要去除血清。
5. 另外DNA不純,攜親戚上陣或內毒素超標,都會(huì )引起轉染效果偏低或者細胞死亡現象的發(fā)生,還是回到開(kāi)頭的那句話(huà),選擇合適的試劑,多參考前輩們的意見(jiàn)。
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