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細胞培養之真菌細菌污染的防治方法
發(fā)布時(shí)間: 2021-09-24 點(diǎn)擊次數: 4162次請遵守細胞污染永恒定律:無(wú)論什么細胞只要是不重要的細胞污染了,立刻加84棄之,重新復蘇新凍存管培養;實(shí)在需要挽救的請參考以下:
細菌污染:主要有洋蔥霍爾伯德菌型污染
確定是非常珍貴的細胞 建議分別配置含10倍慶大霉素和兩性霉素溶液(G/A)的PBS和5倍慶大霉素和兩性霉素溶液(G/A)的*培養基各一份。然后先用10倍雙抗的PBS洗滌細胞5-10次, 然后用5倍雙抗的*培養洗滌細胞3次以上,再加上含雙倍的G/A溶液放培養箱培養,一個(gè)小時(shí)后換液,持續4個(gè)小時(shí)后,再加上正常培養細胞所需的抗生素,過(guò)夜,到最終確定細胞沒(méi)有任何污染物,因此時(shí)細胞受損過(guò)大,建議優(yōu)化培養基方式(血清提高2%-5%)或者立即凍存細胞,一個(gè)月后復蘇。
真菌污染:
污染的多是曲霉菌,白色念珠菌,酵母菌,黑霉菌,孢子菌,真菌主要以預防為主,防治為輔,已經(jīng)污染了,建議采用以下方法:
1. 細胞一旦污染,很難挽救,即使使用制霉菌素或放線(xiàn)菌素D,也是傷敵八千自損一萬(wàn)的辦法,可使用抗生素進(jìn)行查殺,但是高濃度的抗霉菌素對細胞有毒性作用。
2. 把所有細胞從污染的CO2孵箱轉移,采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱(全部,尤其四個(gè)角)。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內一個(gè)小時(shí),使其蒸汽彌漫。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞;
3. 用0.5%新潔爾滅擦拭超凈臺和墻壁,確保不留死角,地面用新潔爾滅消毒液拖地。
4. 將環(huán)境*消毒,整個(gè)培養間高錳酸鉀或者乳酸熏蒸,孵箱內部包括托盤(pán)等全部用苯酚搽洗,封閉2天。
真菌污染預防方法:
1),將細胞移出來(lái),用微量硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤(pán)里加適量硫酸銅或者酸氫二鈉高鹽液體防止霉菌
2)孵箱應定期清潔,大約一個(gè)月左右清潔一次,
3)可在培養基里加兩性霉素或制霉菌素)或[放線(xiàn)菌素D或雙抗進(jìn)行預防。
4)最主要的還是要培養良好的無(wú)菌觀(guān)念,實(shí)驗室盡量不要大聲說(shuō)話(huà),佩戴好口罩,手套,操作時(shí)應小心,避免培養基撒入培養箱以及生物安全柜,這些撒入培養箱的培養基為細菌及真菌的繁殖提供了很好的條件。
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