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內皮細胞的培養方法及內皮微粒的表達
發(fā)布時(shí)間: 2021-09-28 點(diǎn)擊次數: 1528次內皮細胞是每個(gè)組織中不可少的傳導工具,包括萬(wàn)惡的腫瘤,也是在初發(fā)階段,血管先擴增一波,從而大面積進(jìn)攻組織,內皮細胞怎么提取培養呢?
原代內皮細胞分離一般采用的是組織酶消化法,不要天真的以為您只要酶消化下來(lái)的細胞都是內皮細胞了 ,有可能也有成纖維細胞哦 ,這就牽扯到怎么抑制成纖維細胞的生長(cháng),讓內皮細胞趕快成長(cháng)起來(lái)的方法了。
內皮細胞一般采用內皮細胞*培養基來(lái)維持細胞生長(cháng),需要注意的是才分離出來(lái)的細胞一般都不會(huì )采用無(wú)血清的培養基培養,因為無(wú)血清的培養基可能會(huì )導致細胞會(huì )有不貼壁的現象發(fā)生,需要更換無(wú)血清培養方式需等細胞穩定后才可開(kāi)始更換無(wú)血清組分,按比列循序漸進(jìn)更適合細胞的生長(cháng),這也是有些老師在提取原代的時(shí)候使用細胞包被液包被培養瓶的原因。
內皮細胞培養的時(shí)候對培養基的要求很高,即使是細胞株HMEC-1也必須要使用MCDB這種不是很常規的基礎培養基 ,然后加血清,加EGF,加胰島素才能好好生長(cháng),所以細胞培養方式不對 ,努力就會(huì )白費,不要用很激進(jìn)的方法去改變任何細胞的培養方式 ,因為這樣會(huì )讓細胞的部分基因丟失從而導致細胞變異;內皮細胞培養需要勤換液,因為他們的分泌比較多,特別在代次不好的時(shí)候會(huì )很明顯。
原代內皮細胞一個(gè)特別顯著(zhù)的特征就是在細胞代次比較好的時(shí)候它們消化需要的時(shí)間特別短,彷佛這邊才加上胰酶那邊就馬上需要終止了 ,對胰酶比較敏感,而傳代次數太多的細胞或者內皮細胞株就表現不一樣了 ,加上胰酶之后它就像個(gè)沒(méi)有睡醒的孩子一樣 “吹吹打打"才能下來(lái)。
內皮微粒具有轉運蛋白、RNA等信號分子的功能,在調節血栓形成、動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、炎癥反應、血管功能中發(fā)揮著(zhù)重要作用。
內皮微粒表達很多內皮特異性的分子,如CD31、CD146、CD62E、CD51 CDl44, 凋亡誘導下的內皮微粒CD31、CDl05表達增加,促活化因子誘導下CD54、CD62E表達增加;促血栓形成狀態(tài)下,內皮微粒表面的促凝血因子active tissue factor (TF) 、platelet factor 3表達增加。由于內皮微粒表面攜帶有大量?jì)绕ぜ毎谋砻娴鞍缀蜕镄畔?,在不同的病理和生理情況下表達情況發(fā)生改變,是非侵襲性的監測內皮細胞功能的潛在標志。
內皮細胞也是目前研究使用最多的原代細胞,這和它的功能密不可分,cell systems提供37種原代內皮細胞,細胞不采用抗體分選細胞無(wú)抗性 ;單管細胞達100萬(wàn)以上的細胞量,減少您實(shí)驗購買(mǎi)細胞的經(jīng)費。
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