每個(gè)做細胞實(shí)驗的人，不管去哪“浪"，心里都會(huì )有個(gè)牽掛：我的細胞，過(guò)兩天要傳代！

大部分組織細胞離體培養時(shí)，會(huì )以貼壁的形式生長(cháng)（除了取自血、脾或骨髓的細胞）;*培養基中的血清，含有許多帶陽(yáng)性電荷的促細胞附著(zhù)因子（層黏連蛋白 Laminine、纖維鏈接蛋白 Fibronectin 等胞外基質(zhì)），能幫助細胞附著(zhù)于帶陰性電荷的底物上（玻璃或塑料培養容器），并形成鍵結、貼壁伸展。

▲ 陽(yáng)性電荷的促細胞附著(zhù)因子，能幫助細胞附著(zhù)于帶陰性電荷的底物上

所以當細胞長(cháng)滿(mǎn)需要分盤(pán)的時(shí)后，就要想辦法讓細胞和培養底物說(shuō) 再見(jiàn)！也就是所謂的細胞消化（Cell Detachment）。

常見(jiàn)細胞消化法有以下三種：

1、物理機械法

直接用液體吹打或用刮刀，施予外力讓細胞與培養底物分離；適用于貼壁性弱的細胞傳代，但相較于其它消化方法，這種外力無(wú)法量化控制，細胞分散效果差，且可能會(huì )造成大量細胞破損，使內容物釋放到培養基，進(jìn)而影響細胞傳代狀態(tài)。

▲細胞刮勺

2、離子螯合法

細胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來(lái)維持與胞外基質(zhì)的穩定鍵結，當然也包含各種黏附蛋白（例：整合素、鈣黏著(zhù)蛋白、橋粒等），螯合劑會(huì )在不破壞細胞膜表面蛋白的狀況下，抽離這些離子，使黏附蛋白失活而減少細胞-細胞間及細胞-底物間的連接作用，讓細胞較容易在施予外力時(shí)，脫離培養底物并促進(jìn)細胞分散。

0.02% EDTA是細胞傳代較為常用的離子螯合劑，在37℃作用效果較為佳（消化較敏感的細胞可在4℃作用），適用于消化一般貼壁性細胞或細胞表面標記實(shí)驗細胞。

但EDTA無(wú)法用血清終止其反應，所以在消化細胞后必須用緩沖鹽溶液（如：PBS）清洗離心，以免影響后續細胞貼盤(pán)效果。

▲ EDTA（黑）能螯合二價(jià)離子（紅）

3、酶消化法

用蛋白水解酶消化連接細胞及培養底物的蛋白質(zhì)，適用于消化貼壁性稍強的細胞。

細胞消化小技巧

不一定要一次把所有細胞都要消化下來(lái)！

▲ 消化不下來(lái)的細胞（黃）請視情況決定是否再消化一次。

結語(yǔ)

細胞消化 ，是一個(gè)看似很簡(jiǎn)單，但是有很多技術(shù)含量的步驟。消化好壞、是否污染、有無(wú)受傷，都在這短短的五六分鐘里決定。

當我們已經(jīng)可以順利操作細胞培養實(shí)驗，接下來(lái)要思考的，就是如何讓細胞長(cháng)得更健康、更均一、做出來(lái)的實(shí)驗才會(huì )更好。

祝各位的細胞都顆顆透亮、粒粒分明、活力旺盛！