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qPCR中的絕對定量是什么?
發(fā)布時(shí)間: 2021-10-14 點(diǎn)擊次數: 3962次絕對定量目的是使用PCR測定目的基因在樣本中的數量,即拷貝數。
在絕對定量中,想要得到目的基因的拷貝數,需要制作標準曲線(xiàn)圖。制作標準曲線(xiàn)圖需要將標準品稀釋至不同濃度,作為模板進(jìn)行PCR。標準品是已知濃度的模板。
結束PCR后,以測得的CT值為縱坐標,標準品濃度的對數值為橫坐標,繪制標準曲線(xiàn)圖。
對待測樣品的目的基因進(jìn)行檢測時(shí),只需要將得到的CT值代入標準曲線(xiàn)圖,即可計算出樣品中目的基因的拷貝數。
需要注意的是:
1、標準品必須來(lái)源可靠、濃度已知
2、標準品要和待測樣品要同時(shí)在儀器中擴增
3、只能根據標準品覆蓋的濃度范圍,進(jìn)行樣品濃度的推測
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