實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗會(huì )產(chǎn)生大量實(shí)驗數據，一般可以用PCR儀自帶的軟件進(jìn)行收集、分析。但即使有了方便可靠的軟件，我們也需要對原始數據進(jìn)行檢查、再分析，評估數據的質(zhì)量和可靠性。

這需要三個(gè)基本的步驟。

第一步，查看擴增曲線(xiàn)，有必要時(shí)調整基線(xiàn)和閾值。

Ct值由基線(xiàn)和閾值計算得來(lái)，所以他們的值對結果影響很大。軟件會(huì )給出1個(gè)默認的基線(xiàn)和閾值，但不一定是最合適的，需要我們進(jìn)行手動(dòng)調整。

首*行基線(xiàn)的調整。

一般范圍是循環(huán)數3～15，使得靶基因的擴增信號大于背景噪聲。出現不正常的擴增曲線(xiàn)，通常是因為設置了不正常的基線(xiàn)，需要對單個(gè)孔進(jìn)行設置。

比較好的做法是，基線(xiàn)的最小值（起始循環(huán)數）設置在背景噪聲的尾巴后，最大值（結束循環(huán)數）設置為擴增起始點(diǎn)。

循環(huán)范圍在5個(gè)循環(huán)就可以，具體跟擴增曲線(xiàn)的對數圖來(lái)設定。

擴增曲線(xiàn)的對數圖是什么？下期告訴你