細胞轉染是指將外源分子如 DNA RNA 等導入真核細胞的技術(shù)。可分為瞬時(shí)轉染，穩定轉染等

    瞬時(shí)轉染是指外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細胞可存在多個(gè)拷貝數，產(chǎn)生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動(dòng)子和其他調控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒 DNA 轉染效率較高，在轉染后 24-72 h 內分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測。

    穩定轉染是指外源 DNA 既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線(xiàn)性 DNA 比超螺旋 DNA 轉入量低但整合率高。外源 DNA 整合到染色體中概率很小，通常需要一些選擇性標記反復篩選得到穩定轉染的同源細胞系。

主要有下面幾種方法：

化學(xué)法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法；物理法：電穿孔法、顯微注射法、biolistic 顆粒傳遞法；病毒介導法：逆轉錄病毒、腺病毒

A. 陽(yáng)離子脂質(zhì)體法：

    帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。過(guò)程如下圖：

   特點(diǎn)：

    簡(jiǎn)單通用，適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時(shí)需除血清，轉染效率隨細胞類(lèi)型變化大。由于脂質(zhì)體復合物與貼壁細胞的接觸機會(huì )遠大于懸浮細胞，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。

B. 電穿孔法：

    利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾，使其形成利于核酸進(jìn)入的微孔。

C. 逆轉錄病毒（RNA）：

    通過(guò)病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用進(jìn)入宿主細胞，之后反轉錄酶啟動(dòng)合成 DNA 并隨機整合到宿主基因組中。

    特點(diǎn)：穩定轉染，可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等，但攜帶基因不能太大。

D. 腺病毒（雙鏈 DNA）：

    先和細胞表面的受體結合，繼而在αV 整合素介導下被細胞內吞。

    特點(diǎn)：可用于難轉染的細胞。

    影響轉染的因素：

    血清 血清影響復合物的形成，降低轉染效率

    陽(yáng)離子脂質(zhì)體和 DNA 的最佳量在使用血清時(shí)會(huì )有所不同，因此想在轉染培養基中加入血清時(shí)要進(jìn)行條件優(yōu)化。大部分細胞可以在無(wú)血清培養基中幾個(gè)小時(shí)內保持健康，對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用 OPTI-MEM I 培養基。對于對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用 LIPOFECTAMINE 2000。

    抗生素

    比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。

    細胞代數

    轉染前細胞最好經(jīng)過(guò) 1-2 次傳代保證細胞生長(cháng)旺盛容易轉染，注意貼壁細胞一旦長(cháng)滿(mǎn)就不好轉染。

    細胞鋪板密度

    一般轉染時(shí)，貼壁細胞密度為 70%-90%，懸浮細胞密度為 2*10^6--4*10^6 細胞/ml 時(shí)效果較好。確保轉染時(shí)細胞沒(méi)有長(cháng)滿(mǎn)或處于靜止期。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產(chǎn)量。

    DNA 質(zhì)量

    DNA 質(zhì)量對轉染效率影響非常大。一般的轉染技術(shù)基于電荷吸引原理，如果 DNA 不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會(huì )顯著(zhù)影響轉染復合物的有效形成和轉染的進(jìn)行。

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