轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。分為

物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍?zhuān)?/span>

化學(xué)介導方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導的技術(shù)；

生物介導方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉染，和現在比較多見(jiàn)的各種病毒介導的轉染技術(shù)。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導的轉染技術(shù)，是目前最高轉染效率的方法，同時(shí)具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。

但是病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類(lèi)型有很強的選擇性，在一般實(shí)驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導的轉染方法，則各有其特點(diǎn)。需要指出的一點(diǎn)，無(wú)論采用哪種轉染技術(shù)，要獲得*的轉染結果，可能都需要對轉染條件進(jìn)行優(yōu)化。影響轉染效率的因素很多，從細胞類(lèi)型、細胞培養條件和細胞生長(cháng)狀態(tài)到轉染方法的操作細節。下面列舉一些影響因素。

A、DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復合物形成時(shí)不能含血清，因為血清會(huì )影響復合物的形成。

B、一般細胞對無(wú)血清培養可以耐受幾個(gè)小時(shí)沒(méi)問(wèn)題，轉染用的培養液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會(huì )降低轉染效率，轉染培養基中加入血清需要對條件進(jìn)行優(yōu)化。

C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營(yíng)養豐富的無(wú)血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用專(zhuān)用轉染試劑。有條件的話(huà)，可以用無(wú)血清培養基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時(shí)候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞，而是轉動(dòng)培養板讓液體滾動(dòng)在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會(huì )增多。

抗生素，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用抗生素，甚至在準備轉染前進(jìn)行細胞鋪板時(shí)也要避免使用抗生素。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外，為了保證無(wú)血清培養基中細胞的健康生長(cháng)，使用比含血清培養基更少的抗生素量。

這點(diǎn)非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于最佳的生長(cháng)狀態(tài)再做。有文獻說(shuō)傳代不要超過(guò)17代。細胞復蘇后的3代左右時(shí)細胞狀態(tài)最好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態(tài)都會(huì )發(fā)生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實(shí)驗室中保存數月和數年后會(huì )經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會(huì )導致和轉染相關(guān)的細胞行為的變化。如果隨時(shí)間發(fā)現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會(huì )恢復原先的轉染活性。因此，如果觀(guān)察到轉染效率降低，可以試著(zhù)轉染新鮮培養的細胞以恢復最佳結果?；蛘?，幾種來(lái)源于經(jīng)篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售。

用于轉染的最佳細胞密度根據不同的細胞類(lèi)型或應用而異。因轉染試劑對細胞有毒害作用，細胞太少，容易死。一般轉染時(shí)，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2-4×10⁶細胞/ml，確保轉染時(shí)細胞沒(méi)有長(cháng)滿(mǎn)或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實(shí)驗間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產(chǎn)量。細胞的融合度必須要達到90%才能做。

獲得高轉染活性所需選擇的啟動(dòng)子依賴(lài)于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動(dòng)子在大多數細胞類(lèi)型中可以獲得高表達活性。同其他啟動(dòng)子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤病毒)相比，在BHK-21中其活性最高。這三種病毒啟動(dòng)子在T細胞來(lái)源的細胞系，如Jurkat中組成表達水平較低。轉染后在培養基中加入PHA-L和PMA可以激活Jurkat細胞中CMV啟動(dòng)子，而單PMA就足以激活KG1和K562(人骨髓瘤白細胞)中的CMV啟動(dòng)子。SV40啟動(dòng)子的表達在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)時(shí)會(huì )提高，因為大T抗原可以刺激染色體外的合成。

高質(zhì)量的DNA對于進(jìn)行高效的轉染至關(guān)重要。轉染的質(zhì)粒一定純度好、濃度高、無(wú)內毒素。濃度不要低于0.35ug/ul。產(chǎn)物表達，48小時(shí)mRNA表達最高；72h蛋白表達最高。