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    RAW264.7細胞太容易分化,到底怎樣才能養好它?

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-02  點(diǎn)擊次數: 3667次

    養好RAW 264.7之基礎篇



    養好RAW 264.7的第一步,是要對它的基礎培養條件了如指掌,比如生長(cháng)特性、細胞形態(tài)、所需的培養基,甚至培養環(huán)境、傳代比例等等,做到知己知彼,才能百戰百勝。


    細胞名稱(chēng)

    RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)

    細胞別稱(chēng)

    RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7

    種屬

    小鼠(雄性,成年BALB/c鼠)

    組織來(lái)源

    Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤

    生長(cháng)特性

    貼壁細胞

    細胞形態(tài)

    不規則形(圓形、短梭形)

    生長(cháng)培養基

    DMEM+10% FBS+1% P/S

    培養環(huán)境

    氣相:95%空氣;5%CO2  溫度:37℃

    推薦傳代比例

    1:3 - 1:6

    凍存液配方

    55% DMEM+40% FBS+5% DMSO


    圖片

    ▲RAW 264.7生長(cháng)圖片


    養好RAW 264.7之進(jìn)階篇1


    除了基礎條件,其他外界因素也容易引起細胞的“小脾氣",比如運輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對幾種常見(jiàn)的問(wèn)題,小普來(lái)一 一為大家解答。


    問(wèn)題1 :收貨后,細胞不見(jiàn)了


    小普總是會(huì )收到這類(lèi)反饋:收到細胞,期待值滿(mǎn)滿(mǎn)地打開(kāi)包裝,但在顯微鏡下卻找不到細胞!


    這是為RAW 264.7 細胞貼壁較松,快遞運輸路上受到顛簸,可能會(huì )脫落。脫落的細胞懸浮在培養基中不容易聚焦。


    這時(shí)候不用擔心,把細胞放進(jìn)培養箱靜置兩個(gè)小時(shí)就可以看到了。


    如果靜置后看到的細胞仍偏少,請將瓶子里的培養基都轉移到離心管里,1200rpm(約250g)離心3分鐘,即可看到沉淀的細胞。


    細胞全部脫落,慌亂之下可能會(huì )一個(gè)細胞都找不著(zhù)。這個(gè)時(shí)候離心驗證是較為合適的方法。


    問(wèn)題2 :收貨處理后,細胞不貼壁


    將細胞離心收集,用新鮮的培養基重懸細胞放到新的培養瓶里之后,可能會(huì )出現細胞成團漂浮、不貼壁的情況。


    這種情況下,把細胞離心收集,用1mL培養基重懸,慢慢地,輕輕地吹打,直到細胞被吹成單細胞,就可以重新鋪板了。


    RAW 264.7脫落后傾向于抱團,抱團時(shí)細胞是活著(zhù)的,但很難貼壁。記得一定要把聚成團的細胞吹散成單細胞,不然細胞很難重新貼壁。


    養好RAW 264.7之進(jìn)階篇2


    正確的傳代方法是養好RAW 264.7的關(guān)鍵,每一步操作都要細致入微,稍有不慎細胞就分化了。


    RAW 264.7不能用胰酶消化,許多實(shí)驗室用細胞刮傳代,這是一種非常經(jīng)典好用的方法。


    小普在養RAW 264.7細胞這十幾年里,摸索出一個(gè)更不錯的方法:吹打傳代。


    吹打傳代操作簡(jiǎn)單,對養細胞的萌新們更友好,也能更好地控制細胞分化率。



    吹打傳代步驟

    01

    輕拍幾下培養皿

    02

    用1ml 的槍或者巴氏管把細胞吹下來(lái)(吹不下來(lái)的舍棄)

    03

    細胞吹下來(lái)后轉移到15ml離心管

    04

    1200rpm(約250g) 離心3min

    05

    去上清,用新鮮培養基重懸細胞

    06

    按比例接種到新的培養皿中



    吹打傳代時(shí)機

    01

    吹打傳代時(shí)機

    02

    當細胞密度較低的時(shí)候,可能不太好吹下來(lái)。

    03

    當細胞密度達到80%~90%的時(shí)候,最容易吹下。

    圖片

    推薦傳代的密度


    養好RAW 264.7之終結篇


    講了那么多如何處理RAW 264.7分化的情況,那分化了的細胞到底是什么形態(tài)呢?


    圖片

    分化的RA264.7

    分化的細胞呈多角形,體積明顯增大,時(shí)常有較長(cháng)的黑色觸角。






    注意事項


    1

    RAW 264.7細胞三天不傳代更容易分化,很難吹下,每一次接種密度都要控制好;

    2

    分化的細胞貼壁牢固,傳代的時(shí)候請勿強制性吹下這些細胞,只接種容易吹下的那些未分化細胞;

    3

    吹打的力度一定要輕,切勿暴力吹打;


    4

    細胞的貼壁性和培養器皿的材料也有關(guān),有時(shí)RAW 264.7 會(huì )出現太容易吹下的情況,連分化細胞都貼壁較松,此時(shí)更適宜用巴氏管吹打;

    5

    培養時(shí),無(wú)法保證100% 不分化,通過(guò)傳代可以將分化比例控制在一定范圍;

    6

    RAW 264.7分裂活躍,記得每天看一看,周末也要抽點(diǎn)時(shí)間關(guān)心一下它哦~


    養細胞不易,每個(gè)細胞對我們而言,都像是寶寶,含在嘴里怕化了,捧在手里怕摔了。


    正是因為對科研的無(wú)畏堅持,讓我們更有力量接受考驗,因為科研本身,值得敬畏和付出。



    圖片



    RAW 264.7的起源


    加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細胞系。


    他發(fā)現RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,并且能通過(guò)抗體依賴(lài)途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。


    RAW 264.7不分泌A(yíng)-MuLV(但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒),對LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。


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