1、如何正確選擇培養基種類(lèi)？

引用幾款比較經(jīng)典的培養基舉例：

2、如何選用特殊細胞系培養基？

培養某一類(lèi)型細胞沒(méi)有固定的培養條件。在 MEM 中培養的細胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同樣很容易生長(cháng)?？傊?，首先選 MEM 做粘附細胞培養，RPMI-1640 做懸浮細胞培養是一個(gè)好的開(kāi)始。

3、什么培養基中可以省去加酚紅？

酚紅在培養基中被用來(lái)作為 PH 值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應，培養細胞，尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí)，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養基。

4、細胞培養基的配制和儲存應該注意什么？

細胞培養基配好后，要先抽取少許放入培養瓶?jì)仍?7℃培養箱內放置24~48h，已檢測培養液是否有污染，然后方可用于實(shí)驗。配置培養基所需的血清要合格并且保持穩定。一個(gè)批號試用效果良好后，就可一次購入較多同一批號的血清，這樣實(shí)驗條件穩定，配液時(shí)調整pH值較容易。每次配液量以使用兩周左右的量為宜，一次配液不要太多，一是短期內用不完造成營(yíng)養成分損失需要補充，二是量大易造成污染。

5、為何培養基保存于 4 ℃ 冰箱中，顏色會(huì )偏紫色？

培養基保存于 4 ℃ 冰箱中，培養基內的 CO2 會(huì )逐漸溢出，造成培養基越來(lái)越偏堿性，而培養基中的酸堿指示劑 （通常為 phenol red） 的顏色也會(huì )隨堿性增加而更偏紫色。培養基偏堿的結果， 將造成細胞生長(cháng)停滯或死亡。若培養基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾 CO2，以調整 pH 值。

6、什么情況下用到無(wú)血清培養基？

對于應用培養細胞進(jìn)行分離制備細胞生長(cháng)因子、單克隆抗體等應該選擇無(wú)血清培養基。

7、如何選擇正確的血清種類(lèi)？

8、可否使用與原先培養條件不同的血清種類(lèi)？

不能。血清是細胞培養上一個(gè)極為重要的營(yíng)養來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對于細胞的生長(cháng)會(huì )產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會(huì )造成細胞無(wú)法存活。

9、血清滅活是否必須？

一般情況下不建議。熱滅活是以 56℃，30 分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。

實(shí)驗顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多， 這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀(guān)察，像是 "小黑點(diǎn)"，常常會(huì )讓研究者 誤以為是血清遭受污染，而把血清放在 37C 環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀 物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此除了做免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗和培養一些特定細胞，如平滑肌細胞、胚胎干細胞等，不需要做熱滅活處理。

10、培養基中是否添加抗生素？

除特殊篩選系統中外，一般正常培養狀態(tài)下，培養基中不應添加任何抗生素。

11、何時(shí)更換培養基？

視細胞生長(cháng)密度而定，或遵照細胞株基本數據上的更換時(shí)間，按時(shí)更換培養基即可。