在細胞傳代時(shí)，都應該用哪種方法較為合適？或者在做細胞傳代時(shí)都應注意哪些事項呢？怎樣才能做好細胞傳代讓接下的實(shí)驗更順呢？帶著(zhù)這些疑問(wèn)，本期小編匯總些細胞傳代的經(jīng)驗分享給大家，希望對大家做細胞傳代時(shí)有所幫助。

1、細胞傳代的方法都有哪些？

根據不同的細胞采取不同的方法。貼壁生長(cháng)的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長(cháng)的細胞用直接吹打即可傳代；懸浮生長(cháng)的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。

2、原代培養的第一次傳代應注意的問(wèn)題？

細胞沒(méi)有生長(cháng)到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前，不要急于傳代；原代培養時(shí)細胞多為混雜生長(cháng)，不同的細胞有不同的消化時(shí)間，因此要根據需要注意觀(guān)察及時(shí)處理，并根據不同細胞對胰蛋白酶的耐受時(shí)間而分離和純化所需要的細胞；

吹打細胞時(shí)動(dòng)作要輕巧盡可能減少對細胞的損傷；第一次傳代時(shí)細胞接種數量要多一些，使細胞能盡快適應新環(huán)境而利于細胞生存和增值；隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養瓶。

3、使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的？應如何處理？

EDTA作用較胰蛋白酶緩和，主要作用在于能從組織生存環(huán)境中吸取Ca2+、Mg2+，這些離子是維持組織完整的重要因素。但EDTA單獨使用不能使細胞*分散，因而常與胰蛋白酶按不同比例混合使用，效果較好。常用比例為1：1或者2份EDTA：1份胰蛋白酶。EDTA的工作液濃度為0.02%，用不含Ca2+、Mg2+的BSS配置。如果使用EDTA，在終止消化前，需用緩沖液將消化液清除后才能加培養液。第一次開(kāi)瓶后應立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于 –20 ℃，避免反復冷凍解凍造成胰蛋白酶的活性降低，并可減少污染的機會(huì )。

4、欲將一般動(dòng)物細胞離心下來(lái)，其離心速率應為多少轉速？

欲回收動(dòng)物細胞，其離心速率一般為800~1000 rpm，5~10 分鐘，過(guò)高的轉速，將造成細胞死亡。

5、細胞的接種密度為何？

依照細胞株基本數據上的接種密度或稀釋分盤(pán)的比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無(wú)法生長(cháng)的重要原因之一。

6、細胞交叉污染的可能原因？

多種細胞系進(jìn)行維持傳代操作時(shí)，各細胞系所需的器材和溶液沒(méi)有嚴格分開(kāi)，往往會(huì )使一種細胞被另一種細胞污染。

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