1、冷凍培養基為什么要加DMSO？

因為細胞在不加任何保護劑的情況下直接凍存時(shí)，細胞內外的水分都會(huì )很快形成冰晶，冰晶的形成將造成細胞損傷，還可引起細胞的的死亡。目前多采用甘油和DMSO做保護劑。這兩種細胞無(wú)明顯毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞，可以使冰點(diǎn)下降，提高包膜對水的通透性。

2、DMSO 的等級和無(wú)菌過(guò)濾的方式為何？

冷凍保存使用的 DMSO 等級，必須為 Tissue culture grade 的 DMSO，其本身即為無(wú)菌狀況，第一次開(kāi)瓶后應立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于 4 ℃，避免反復冷凍解凍造成 DMSO 的裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染的機會(huì )。若要過(guò)濾 DMSO，則須使用耐 DMSO 的 Nylon 材質(zhì)濾膜。

3、欲冷凍保存時(shí)，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？

冷凍管內細胞數目一般為 1x106 cells/ml vial，融合瘤細胞則以 5x106 cells/ml vial 為宜。

4、冷凍保存細胞的方法？

冷凍保存方法一：冷凍管置于 4 ℃ 30~60 分鐘 →-20 ℃ 30 分鐘 → -80 ℃ 16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽 vapor phase 長(cháng)期儲存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序的可程序降溫機中每分鐘降 1~3 ℃ 至 –80 ℃ 以下， 再放入液氮槽 vapor phase 長(cháng)期儲存。–20 ℃ 不可超過(guò) 1 小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入 –80 ℃ 冰箱中，存活率稍微降低一些。

5、細胞凍存太多會(huì )不會(huì )浪費？

每一種細胞系都應有充足的凍存儲備，防止由于細胞污染等因素造成的細胞系的絕種，而且每一批次培養的細胞狀態(tài)都不同，應該挑選幾個(gè)狀態(tài)較好的批次凍存保種。另外二倍體細胞等有限細胞系如果暫時(shí)不用最好凍存以免傳代太多，造成細胞衰老或者發(fā)生改變。