在細胞培養過(guò)程中會(huì )出現這樣或那樣的問(wèn)題，這些問(wèn)題從細胞生長(cháng)角度來(lái)說(shuō)，針對細胞不貼壁、生長(cháng)緩慢、生長(cháng)不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。

一、培養細胞不貼壁

可能原因： 

●胰蛋白酶消化過(guò)度 ；

●支原體污染 ；

●培養基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）；              

●細胞老化 ；

●接種細胞起始濃度太低或太高 。

解決方法： 

●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度； 

●分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物；

●使用無(wú)菌醋酸溶液調整pH值或充入無(wú)菌CO2 ；

●啟用新的保種細胞 ；

●調節最佳接種細胞濃度。

二、懸浮細胞成簇

可能原因： 

●培養液中含鈣、鎂離子 ；

●支原體污染；

●蛋白酶過(guò)度消化使得細胞裂解；

●DNA污染 。

解決方法： 

●用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸細胞獲得單細胞懸液；

●分離培養物，檢測支原體；

●用DNaseI處理細胞。

三、培養細胞生長(cháng)緩慢

可能原因：

●由于更換不同培養液或血清； 

●培養液中一些細胞生長(cháng)必需成分如谷氨酰胺或生長(cháng)因子耗盡或缺乏或已被破壞； 

●培養物中有少量細菌或真菌污染； 

●試劑保存不當； 

●接種細胞起始濃度太低； 

●細胞已老化； 

●支原體污染 。

解決方法： 

●比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長(cháng)實(shí)驗，讓細胞逐漸適應新培養液； 

●換入新鮮配置培養液，或補加谷氨酰胺及生長(cháng)因子；

●用無(wú)抗生素培養液培養，如發(fā)現污染，丟棄培養物；

●血清需保存在-10到-20℃。培養液需在2-8℃避光保存。含血清*培養液在2-8℃保存，需在1周內用完；

●增加接種細胞起始濃度； 

●換用新的保種細胞； 

●分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。

四、培養細胞生長(cháng)不好

可能原因：

●細胞本身的狀態(tài)

細胞傳代次數多，細胞老化；

細胞的接種量：接種量過(guò)低，細胞生長(cháng)緩慢；

細胞傳代時(shí)間過(guò)晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長(cháng)；

胰酶消化時(shí)間過(guò)長(cháng)或過(guò)短：時(shí)間過(guò)長(cháng)，細胞死亡；時(shí)間過(guò)短，細胞未*分離而成團，細胞死亡；

細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。

●污染

支原體污染；

霉菌污染。

●培養基或血清

更換血清或培養基之前未進(jìn)行驗證；

選擇的培養基是否合適；

培養基配制是否準確無(wú)誤。

●培養環(huán)境

CO2供應是否正常；

培養箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法：

根據以上四個(gè)方面的可能原因，做出針對性的解決方案

●注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數、接種量等；

●避免產(chǎn)生污染（用正規、合法、可溯源的血清）；

●要用合適的血清或培養基，最好經(jīng)過(guò)驗證；

●注意實(shí)驗室的環(huán)境。

五、培養細胞死亡

可能原因： 

●培養箱內無(wú)CO2； 

●培養箱內溫度波動(dòng)太大； 

●細胞凍存或復蘇過(guò)程中損傷； 

●培養液滲透壓不正確； 

●培養液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。

解決方法： 

●檢測培養箱內CO2； 

●檢查培養箱內溫度； 

●取新的保存細胞種； 

●檢測培養液滲透壓； 

●換入新鮮培養液。

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