-
CAT活性的相-抽提分析法
發(fā)布時(shí)間: 2021-12-16 點(diǎn)擊次數: 1049次材料與儀器
轉染細胞
氯霉素 Tris·Cl TMPD 二甲苯
離心機 離心管 培養箱步驟
一、來(lái)源于哺乳動(dòng)物細胞
1. 按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法,制備哺乳動(dòng)物細胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細胞方法來(lái)收集細胞,則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2至4代替。2. 室溫下,300 g 離心5 min,棄去上清。每107細胞加入1 ml 低滲緩沖液,離心,棄上清。然后每107細胞加Triton裂解液200 μl。
二、來(lái)源于植物原生質(zhì)體1. 室溫下,2 000~4 000 g 離心5 min,將植物原生質(zhì)體細胞收集于1.5 ml 的微量離心管中,棄去上清。
2. 往細胞沉淀加50 μl 低滲緩沖液,在旋渦混合器上劇烈振蕩,將離心管置于-70℃ 15 min以上,或置于干冰/乙醇浴中5 min 以?xún)鼋Y樣品。融解樣品,在室溫下13 000 g 離心2 min,將上清移入一個(gè)干凈管中。
3. 對于分析50 μl 細胞提取液,配置如下CAT分析混合液20 μl 0.01 μCi/μl [3H]氯霉素
5 μl 5 mg/ml 丁酰輔(酶)A
5 μl 2 mol/l Tris·Cl,pH8.0
20 μl H2O
4. 對每組分析,將50 μl CAT分析混合液加入50 μl 細胞提取液中。37℃溫育30~90 min。5. 用200 μl 2:1的TMPD/二甲苯劇烈報蕩提取乙?;穆让顾?,離心并移出上層液相至一只閃爍瓶中。
6. 樣品中加3~5 ml 閃爍液,計數測定CAT的活性。同實(shí)驗其他方法
CAT活性的層析分析法
1. 100 mm 培養皿中的轉染了CAT表達質(zhì)粒的貼壁細胞,用PBS洗兩次,每次5 ml每培養皿加入1 ml TEN溶液。將細胞置于冰浴5 min。 2. 用橡膠
原位裂解細胞的CAT分析法
1. 60 mm 培養皿中轉染了CAT表達質(zhì)粒的細胞,用2 ml PBS洗1次。每培養皿加入2 ml 低滲緩沖液,在室溫下溫育2~5 min。 2. 吸去低滲緩沖液,加入400 μl T
人生長(cháng)激素的放射免疫分析法
1. 取轉染了hGH表達質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物細胞的培養液100~500 μl。 2. 加100 μl 培養液或標準品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-
以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹:
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù),提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。
- 下一篇:人生長(cháng)激素的放射免疫分析法
- 上一篇:含甲酰胺的測序膠
-
血清系列
-
細胞轉染
-
支原體清除
-
細胞凍存
-
實(shí)驗耗材
-
分子試劑
-
細胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO(東洋紡)
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner(格瑞納)
-
IKA(艾卡)
-
化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測
-
細胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細胞類(lèi)-實(shí)驗耗材
-
原代細胞
-
植物檢測系列試劑盒
-
SERANA
-
細胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
-
類(lèi)器官培養
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細胞因子分子
-
生物樣本庫