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    人生長(cháng)激素的放射免疫分析法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-16  點(diǎn)擊次數: 910次

    材料與儀器

    hGH表達質(zhì)粒
    洗滌液 親和素包被珠
    試管 γ計數儀

    步驟


    1.  取轉染了hGH表達質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物細胞的培養液100~500 μl。

    2.  加100 μl 培養液或標準品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-標記的抗體溶液,混合。加入1顆親和素包被珠,蓋上試管蓋或用Parafilm膜封口,室溫下在一水平旋轉器上以約170 r/min 搖動(dòng)下溫育90 min。

    3.  加2 ml 冼滌液洗磁珠兩次。*吸干洗滌液。
     
    圖一、人生長(cháng)激素表達載體
    圖一、人生長(cháng)激素表達載體
     
    4.  將試管置于γ計數儀上計數1 min。
     
    5.  用試劑盒中的hGH標準品測得的數據繪制標準曲線(xiàn)。用這個(gè)標準曲線(xiàn)來(lái)計算未知樣品的hGH含量。


    同實(shí)驗其他方法

    CAT活性的層析分析法

    1.  100 mm 培養皿中的轉染了CAT表達質(zhì)粒的貼壁細胞,用PBS洗兩次,每次5 ml每培養皿加入1 ml TEN溶液。將細胞置于冰浴5 min。   2.  用橡膠

    原位裂解細胞的CAT分析法

    1.  60 mm 培養皿中轉染了CAT表達質(zhì)粒的細胞,用2 ml PBS洗1次。每培養皿加入2 ml 低滲緩沖液,在室溫下溫育2~5 min。 2.  吸去低滲緩沖液,加入400 μl T

    CAT活性的相-抽提分析法

    一、來(lái)源于哺乳動(dòng)物細胞 1.  按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法,制備哺乳動(dòng)物細胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細胞方法來(lái)收集細胞,則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2

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