發(fā)布時(shí)間： 2022-02-28 點(diǎn)擊次數： 1245次
一．RAW264.7細胞背景介紹
細胞取材于A(yíng)belson小鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤組織，是科研上尤為常用的炎癥細胞模型之一。該細胞易于增殖，有高效DNA轉染力，對RNA干擾敏感，常用作轉染宿主細胞和復制小鼠諾如病毒。細胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原陰性。據報道，該細胞建系后已不分泌且檢測不到病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成實(shí)驗陰性?？梢钥贵w依賴(lài)性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞，LPS或PPD處理2天后可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無(wú)作用。
二．RAW264.7細胞形態(tài)特征
1、RAW264.7細胞一般為圓形或橢圓形，細胞核為圓形或橢圓形，染色較深。貼壁特別牢固。若細胞呈多角形時(shí)，細胞為激活狀態(tài)。
2、RAW264.7具有吞噬能力，當細胞吞噬抗原后，細胞會(huì )釋放趨化因子，進(jìn)一步促進(jìn)細胞伸出偽足，增強粘附攀爬能力。若細胞吞噬抗原過(guò)多、培養環(huán)境惡劣，細胞剛傳完代比較稀疏的時(shí)候，都會(huì )讓該細胞呈現梭形、長(cháng)梭形，鏡下會(huì )看到具有細長(cháng)偽足的小細胞被類(lèi)似上皮的梭形細胞。
3、這個(gè)細胞屬于慢熱型的，很難消化，消化時(shí)間不夠則導致細胞無(wú)法消化下來(lái)，消化時(shí)間太長(cháng)，傳代之后就會(huì )長(cháng)個(gè)角給你看看，使勁吹打和細胞刀刮下來(lái)，則傳代之后不只是長(cháng)個(gè)角給您看看了，還會(huì )飄起很多小黑點(diǎn)，而且這種細胞傳代時(shí)接種密度要大，否則也容易使巨噬細胞分化，細胞變形，并且不能恢復，這是培養這種細胞時(shí)最需要注意的問(wèn)題。
4、RAW264.7細胞生長(cháng)時(shí)喜歡結伴。正常生長(cháng)狀態(tài)應該是一小片一小片的生長(cháng)，片片之間不連接，等到長(cháng)到更多更密的時(shí)候會(huì )連成大片，并疊加成層。疊加成層的細胞需要更多的營(yíng)養，一旦營(yíng)養跟不上，細胞也會(huì )長(cháng)個(gè)角給你瞅瞅，所以需要在細胞疊加的時(shí)候進(jìn)行操作。
5、RAW264.7細胞傳代后貼壁迅速，半小時(shí)就能貼上一大片，剛貼壁是細胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀(guān)察如小珍珠狀一個(gè)個(gè)地散落于瓶底面。若這個(gè)時(shí)候覺(jué)得活化的細胞較多，即長(cháng)梭形的細胞較多時(shí)，可在細胞傳代消化重新貼壁半小時(shí)后進(jìn)行換液，只保留生長(cháng)狀況較好的細胞。
6、RAW264.7細胞的生長(cháng)對血清要求比較高，血清不好會(huì )導致細胞生長(cháng)情況變差。這是一個(gè)大胃王，所以在看到培養基變黃的時(shí)候不要遲疑，立馬換液處理。
1、培養之前，一切與細胞接觸的玻璃器皿和器具都要進(jìn)行熱源處理。（200-250℃烘烤4-6h）
我們的消化及傳代方法：
方法一、消化液：0.5%胰酶、0.2EDTA，實(shí)驗前加溫到37℃以T25培養瓶為例：
1、細胞貼壁生長(cháng)，長(cháng)滿(mǎn)瓶底的95%時(shí)，棄去培養液，加D-HANKS漂洗兩次；
2、加入胰酶和EDTA的消化液1-2ml，消化37℃約2-5min，鏡下可看見(jiàn)細胞基本脫落即終止消化，收集消化后的細胞；（因為底層的細胞一般長(cháng)有偽足，它緊緊的貼在瓶壁上，更難消化，消化時(shí)可先收集上層細胞，然后再消化底層細胞，每次消化下來(lái)的細胞不能放在同一瓶里）。
3、加入D-HANKS漂洗兩次，加入胰酶和EDTA的消化液1-2ml，37℃消化約2-5min，繼續消化底層的細胞，鏡下可看見(jiàn)細胞基本脫落即終止消化，單獨收集消化后的細胞；
4、加入新培養液10ML輕輕彈散混懸細胞，按需要分入新的培養瓶中，37℃CO2培養箱，幾小時(shí)后即可貼壁。
四、凍存的注意事項：
1、RAW264.7的凍存過(guò)程應盡量減少熱源對細胞的影響，這樣對細胞種子的潔凈度有更好的保障。
2、這種細胞對空間狀態(tài)很敏感，所以復蘇的細胞密度或復蘇細胞數量控制在10^4-10^5為宜，這種接種密度接種在75cm2培養瓶中養2天后細胞密度即可到達70-80%，若細胞在復蘇的時(shí)候有偽足，先讓細胞生長(cháng)到堆疊起來(lái)，然后再進(jìn)行傳代，底部細胞棄掉，盡量選擇好的血清培養，可讓新生細胞慢慢達到未激活狀態(tài)。
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