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    誘導與檢測方法

    發(fā)布時(shí)間: 2022-02-28  點(diǎn)擊次數: 1005次

    同學(xué)A:


    使用細胞細胞包被液包被細胞培養板,將傳代或復蘇凍存的人間充質(zhì)干細胞接種到6孔板上,密度為2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔,置于37℃,5% CO2培養箱中培養,當細胞匯合度達到80%-90%時(shí),小心的將孔內間充質(zhì)干細胞培養基吸掉,向6孔板中加入2mL人間充質(zhì)干細胞脂肪分化培養基(此套裝包含基礎500ml,脂肪細胞分化因子:5ml,干細胞生長(cháng)維持因子:5ml,胎牛血清:25ml ),以此記為第0天。



    一、細胞誘導前可使用多聚賴(lài)氨酸溶液進(jìn)行細胞包被,以便細胞更好的進(jìn)行貼壁。



    二、每隔1-2天更換新鮮的人間充質(zhì)干細胞脂肪分化培養基;

    注意:為防止脂肪細胞脫落,建議誘導過(guò)程中出現大量脂肪細胞結節之后,換液形式變?yōu)槊刻煲淮伟肓繐Q液。


    三、 誘導14-21天期間,視細胞的形態(tài)變化及生長(cháng)情況進(jìn)行染色。







    以下是總結的染色方法     

    脂肪油紅染色,有的是動(dòng)物/人體脂肪組織切片,或細胞爬片。各有操作稍有差異。


    *成熟飽滿(mǎn)的脂肪細胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以壓片,切片都要考慮到這個(gè)問(wèn)題。 


    細胞爬片細胞溶液脫落,特別是脂滴大的。操作務(wù)必要輕柔。不要把細胞沖掉。


    如果做脂肪組織冰凍切片,冰凍切片要適當厚一些,一般為10-15µm,切片太薄容易導致脂肪流失


    如果培養載體為塑料制品,hoechst33342染核的話(huà),塑料板自發(fā)熒光也為藍色,必須考慮波長(cháng),激發(fā)波長(cháng)/發(fā)射波長(cháng)=485nm/572nm



    誘導的小鼠MMSC-BM的成脂肪細胞

    染色步驟:

    (1) 先小心輕緩倒去培養液。 
    (2) 用pbs輕緩漂洗。
    (3)加10%中性甲醛或者95%以上的酒精固定30min以上
    (4) 稀釋改良型即用油紅染色試劑盒,油紅:PBS=3:2,室溫放置10min
    (5)染色10-20min左右,加的體積覆蓋住板底即可,如6孔加1.5ml,24孔加0.5-1ml。
    (6)脫色,用75%酒精/60%異丙醇漂洗,除去多余的染料

    (7) 復染,淡蘇木染色1/5分鐘,pbs漂洗(這一步不做也可,看試驗需要,并且蘇木素會(huì )把胞漿染紅,如要顯示核, hoechst33342也可以,濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上)。
    (8)甘油明膠封片(封片后可長(cháng)期保存)。

    (9) 若不用明膠封片,請盡快拍照。


    同學(xué)B:

    油紅O染色試劑盒在傳代培養中,接種密度是影響體外培養間質(zhì)干細胞增殖潛能的重要因素。低密度接種時(shí),間質(zhì)干細胞的增殖能力明顯提高,而誘導細胞分化時(shí)則需要較高的細胞密度,這可能與分化時(shí)細胞與細胞間的相互作用有關(guān)。而在培養過(guò)程中,若細胞過(guò)度融合會(huì )促進(jìn)其分化趨向,故要保持干細胞未分化狀態(tài),要及時(shí)傳代。


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    安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù),提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。




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