材料與儀器

細胞懸液／貼壁細胞 [35S]標記L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物
PBS(冷凍) 37℃ 長(cháng)期標記培養基
75 cm2 組織培養瓶

步驟

1. 在預熱的 37℃ 長(cháng)期標記培養基中制備 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液（見(jiàn)基本方案步驟 1）。

2.1 對于懸浮細胞：用預熱的長(cháng)期標記培養基準備并洗細胞一次（見(jiàn)基本方案步驟 2）。

在 25 ml 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液中重懸 0.5 ×107～2 ×107 細胞，并轉移到 75 cm2 組織培養瓶中。

2.2 對貼壁細胞： 75 cm2 組織培養瓶中生長(cháng) 0.5 ×107 ～2 ×107 的貼壁細胞（80% ～90%融合），在 CO2 培養箱中。用預熱的長(cháng)期標記培養基洗細胞一次（見(jiàn)備擇方案 1 步驟 3）。每個(gè) 75 cm2 組織培養瓶中加入 25 ml 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液。

3. 擰緊蓋子以防 [35S] 標記的化合物揮發(fā)。在 CO2 培養箱內培養 16 h。

4. 洗細胞并測定摻入量（見(jiàn)基本方案步驟 5～7；或備擇方案 1 步驟 6～8）

注意事項

常見(jiàn)問(wèn)題

同實(shí)驗其他方法