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    夏天到了,您做好預防細胞污染了嗎?

    發(fā)布時(shí)間: 2022-06-17  點(diǎn)擊次數: 1546次

    注意事項:

    夏天到了,天氣炎熱,空氣中的溫度濕度都在上升,這時(shí)最易滋生細菌等微生物,導致細胞培養過(guò)程會(huì )沒(méi)有那么的順利,總是被污染,而且微生物繁殖的速度非???。今天我們就來(lái)說(shuō)道說(shuō)道細胞污染應該怎么預防、處理。


    目前細胞污染大致可分為:細菌、真菌、支原體、黑膠蟲(chóng)、病毒等污染。那么想要解決問(wèn)題,我們就需要知道細胞是遭受了何種污染,才可對癥下藥。接下來(lái)我們將帶領(lǐng)大家逐步分析這些污染。



    細 菌


    細菌污染時(shí),培養基在短時(shí)間內變成黃色或白色渾濁,有時(shí)稍加震蕩,便會(huì )有很多混濁物漂起。有些狀況下培養基顏色改變不明顯但細胞形態(tài)會(huì )變異(出現多角,多核狀況)、細胞不附著(zhù)。


    細菌屬于原核生物,比細胞小很多,在顯微鏡下或成黑色細沙狀,或背景有大量黑點(diǎn)??赡茉斐杉毎鲋尘徛蛐螒B(tài)上的改變(多角、多核等),細胞質(zhì)中產(chǎn)生空泡、細胞不附著(zhù)。


    如遇細菌污染,我們可以如何處理呢?

    合理使用相應抗生素可殺滅細菌:

    抗生素作用對象使用比例儲存條件
    卡那霉素溶液細菌(如G+、G-)、支原體稀釋:1:100-20oC
    硫酸慶大霉素溶液細菌(如G+、G-)、支原體稀釋: 1:1000AMB室溫(15-30℃)
    青鏈雙抗細菌(如G+、G-)稀釋: 1:100-20oC
    青鏈雙抗,10濃縮液細菌(如G+、G-)稀釋: 1:1000-20oC
    青鏈霉素,制霉菌素三抗細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
    青鏈霉素,兩性霉素素B三抗細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
    青鏈霉素,新霉素三抗細菌(如G+、G-)稀釋: 1:100-20oC



    真 菌


    真菌指的是類(lèi)似棉絮狀的漂浮物,真菌是真核生物,比細胞大。在顯微鏡下可觀(guān)察到菌絲體,真菌有菌絲體,呈絲狀、管狀、樹(shù)狀、串珠狀。真菌一般呈菌落聚集生長(cháng)。污染早期不會(huì )使培養基變黃。


    細胞被真菌污染后,仍可生長(cháng),長(cháng)時(shí)間細胞的活力狀態(tài)會(huì )變差,梅雨季時(shí)的污染率會(huì )提高。


    真菌的種類(lèi)也比較多:酵母菌、念珠菌、霉菌(青霉菌、根霉菌、曲霉)、蕈菌等。這些菌類(lèi)都有各自的特點(diǎn),很容易區分。



    酵母菌:成串的卵狀物,體積為細胞的1/5~1/10倍,可由出芽生殖時(shí)的一大一小連體結構識別,污染嚴重時(shí)會(huì )造成培養基pH值改變,不易去除。


    念珠菌:卵圓狀,在細胞周邊生長(cháng)。

    霉菌:霉菌在我們的生活中無(wú)處不在,它比較青睞于溫暖潮濕的環(huán)境,一有合適的環(huán)境就會(huì )大量的繁殖,有綠色,毛茸茸的青霉菌,還有像樹(shù)根一樣根霉菌。


    如果發(fā)現真菌污染,我們如何進(jìn)行處理呢?

    合理使用相對應的抗生素,可有效殺滅真菌污染:





    抗生素作用對象使用比例儲存條件
    兩性霉素素B真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000-20oC
    制霉菌素真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋:1:100 ~ 1:1000-20oC
    青鏈霉素,制霉菌素三抗細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
    青鏈霉素,兩性霉素素B三抗細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC



    支 原 體


    支原體常來(lái)源于實(shí)驗人員(支原體常見(jiàn)于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道)、動(dòng)物源血清及胰酶、消毒不*的器具,體積只有0.15~0.3μm,所以能通過(guò)一般培養基0.2μm過(guò)濾膜進(jìn)入培養基體系,培養基不會(huì )變黃,所以污染時(shí)不容易用常規方法發(fā)現,光學(xué)顯微鏡難以辨識。






    支原體革蘭染色為陰性,大部分支原體繁殖速度比細菌慢,對青霉素類(lèi)的抗生素不敏感。污染不但會(huì )緩慢的改變細胞形態(tài)(拉絲、鋪展)、增殖、基因表達、蛋白合成及代謝反應,它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR或Western Blot結果偏差。


    方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)的使用方法:


    1. 加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培養基中,保持受污染的細胞在混合液中培養4天,期間可用含 BIOMYC-1 的新培養基對細胞進(jìn)行傳代;

    2. 4天后,加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培養基中,并維持培養3天,期間可進(jìn)行傳代。

    3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續 2-3 次處理周期。

    4. 每過(guò)一個(gè)周期,細胞需要做支原體污染檢測,以確認效果,從而適當減少實(shí)驗過(guò)程。


    方案二:BIOMYC-3(03-038)的使用方法:

    1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培養基中;

    2. 持續培養14天,期間可進(jìn)行傳代;

    3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續 2-3 次處理周期。

    4. 每過(guò)一個(gè)周期,細胞需要做支原體污染檢測,以確認效果,從而適當減少實(shí)驗過(guò)程。



    提 示


    支原體殺除試劑對實(shí)驗幾乎沒(méi)有影響,可進(jìn)行細胞實(shí)驗;如果客戶(hù)使用其中一種方案,不能清除支原體,說(shuō)明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內;最佳方案是先用方案一處理一周期,再用方案二處理一周期,然后做支原體檢測。



    黑 膠 蟲(chóng)


    目前科學(xué)界對黑膠蟲(chóng)并無(wú)定論,認為是不明沉淀現象或多種未知生物污染現象的通稱(chēng)。


    黑膠蟲(chóng)不是一個(gè)新的物種,是大家對顯微鏡下會(huì )活躍游動(dòng)或原代打轉、顫動(dòng)的未經(jīng)測序鑒定的微生物的別稱(chēng)。因為多呈黑點(diǎn)的游動(dòng),被大家稱(chēng)為“黑膠蟲(chóng)"。實(shí)際上,它不是蟲(chóng)子,經(jīng)過(guò)我們對多個(gè)客戶(hù)提供的黑膠蟲(chóng)樣本測序,發(fā)現實(shí)際上它是各種細菌。大多數細菌都有鞭毛,這也就不難理解,它為啥會(huì )像蟲(chóng)子一樣游動(dòng)或原地打轉,顫動(dòng)。



    在高倍率顯微鏡頭下,可觀(guān)察到各式形狀的小黑點(diǎn)(卵圓狀、球狀、桿狀等)、活躍的布朗運動(dòng)及明顯游動(dòng)現象。

    復蘇或傳代時(shí)往往會(huì )出現黑膠蟲(chóng)污染,并且與細胞呈現此消彼長(cháng)的現象,部分黑膠蟲(chóng)具有細胞毒性,可引起細胞生長(cháng)遲緩或裂解凋亡,培養基不渾濁。



    方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)和三抗(03-033)的使用方法:


    1. 加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培養基中,保持受污染的細胞在混合液中培養 4 天。期間需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養基;

    2. 4天后,加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培養基中,并維持培養 3 天;

    3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續 2-3 次如上處理循環(huán)。 


    方案二:BIOMYC-3(03-038)和三抗(03-033)的使用方法:

    1. 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培養基中;

    2. 持續培養14天,期間每2-3天更換一次培養基;

    3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續 2-3 次如上處理循環(huán)。

    4. 在處理過(guò)程中,細胞需要做支原體污染檢測,以確認效果,從而適當減少實(shí)驗過(guò)程。 



    以上污染與實(shí)驗室環(huán)境,溫度濕度等都有較大的關(guān)系,因此細胞房我們也需要提前做好預防。




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