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免疫細胞轉染實(shí)操時(shí)的幾大步驟說(shuō)明
發(fā)布時(shí)間： 2022-10-09 點(diǎn)擊次數： 573次對于免疫細胞轉染實(shí)驗，我們拿脂質(zhì)體為例，其作為體內和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體，DNA并沒(méi)有預先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動(dòng)結合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過(guò)內吞被導入細胞。具體實(shí)操時(shí)的步驟如下：1.細胞培養：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細胞培養液，37℃二氧化碳培養密度至40%~60%，密度過(guò)大，轉染后不利篩選細胞。2.轉染液在EP管中制備(為轉染每一個(gè)孔細胞所用的量)：A液：用不含血清培養基稀釋1ug質(zhì)粒DNA；B液：用不含血清培養基稀釋2ul脂質(zhì)體。分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。3.吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。4.轉染準備：用1mL不含血清培養液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養液。5.轉染：把A/B復合物緩緩加入培養液中，搖勻，37℃恒溫箱置6~24小時(shí)，吸除無(wú)血清轉染液，換入正常培養液繼續培養。6.瞬時(shí)轉染后，可在48-72h細胞長(cháng)滿(mǎn)之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過(guò)表達效率。- 下一篇：為什么細胞培養需要用到胎牛血清？
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