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原代細胞轉染試劑的轉染操作指導
發(fā)布時(shí)間： 2022-09-08 點(diǎn)擊次數： 669次細胞轉染是外源基因進(jìn)入真核細胞的一種重要方法。這些外源DNA或RNA通過(guò)原代細胞轉染試劑的包裝輔助才能順利進(jìn)入細胞，發(fā)揮相應的作用，進(jìn)而研究其細胞功能及相應的影響。廣泛用于基因功能研究、調控基因表達、癌癥、疾病模型相關(guān)研究和重組蛋白研究等生物學(xué)試驗。細胞轉染試劑的轉染效率高，細胞毒性小，適合各種核酸分子或蛋白質(zhì)的轉染實(shí)驗。目前原代細胞轉染試劑的轉染操作主要有三種方法：生物轉染，物理轉染和化學(xué)轉染。生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因導入載體，以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見(jiàn)，其侵染效率可以達到90%以上，但常因安全性等問(wèn)題，很多實(shí)驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因槍?zhuān)瑹o(wú)論哪一種都需要特定的設備，且性能好的設備價(jià)格也都很昂貴。化學(xué)轉染方法是生物醫學(xué)研究中常用的轉染方法，主要包括陽(yáng)離子脂質(zhì)體和陽(yáng)離子聚合物。其基本原理是利用陽(yáng)離子的化學(xué)分子與帶有負電荷的核酸通過(guò)正負電荷作用形成穩定的復合物。一方面使復合體整體帶上正電荷（多數細胞膜表面帶有弱的負電荷，通過(guò)電荷作用吸引復合體到細胞膜表面）；另一方面對線(xiàn)性的核酸進(jìn)行濃縮，使其體積變小更易穿透細胞膜。
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