培養細胞最擔心的就是細胞污染，這期繼續分享如何辨別細胞污染的經(jīng)驗。

★識別支原體污染

這是一種很難發(fā)現卻經(jīng)常存在的問(wèn)題。

• 支原體是最小的（0.3 μm）能夠自我復制的有機體，倒置顯微鏡下通常觀(guān)察不到。

• 支原體沒(méi)有細胞壁，對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺(jué)的，可能直到出現了可以觀(guān)察到的病變或發(fā)現細胞正常功能喪失的時(shí)候，才意識到是發(fā)生了支原體感染。

• 在沒(méi)有采用特殊的染色方法，也沒(méi)有觀(guān)察到病變的情況下，實(shí)驗總是不成功，就應懷疑被支原體污染。預防支原體污染的惟-途徑是經(jīng)常對細胞進(jìn)行篩選。

   

★防止支原體感染

• 只使用那些證明沒(méi)有污染支原體的血清和培養基。

• 只接受那些保證沒(méi)有支原體感染的細胞。

注意：當你怎么樣也得不到一種細胞表面蛋白的抗體，或不能有效地表達某種蛋白質(zhì)時(shí)，可能是由于使用了被支原體感染的細胞。

★檢測支原體感染

如果這株細胞對你十分重要，那么就應該每4~6周對細胞進(jìn)行檢測，通常使用下面幾種方法：

●支原體的熒光染色是簡(jiǎn)單、便宜也是常用的方法。

●使用支原體的特異引物進(jìn)行PCR檢測。如果實(shí)驗室具備PCR儀和電泳條件，那么這種方法可能是尤為簡(jiǎn)單的手段?？梢宰约涸O計引物（設計好恰當的對照），也可以從公司購買(mǎi)引物。

●把細胞樣品送到能進(jìn)行支原體檢測的公司檢測。這樣做雖不如自己檢測快（盡管托給公司比較容易，但會(huì )很貴），只有一個(gè)好處就算是不用自己親自動(dòng)手。

注意：如果你發(fā)現了支原體污染

●合適的方法是立即把細胞丟棄，從新復蘇。

●可以不理會(huì )它。

●可以采取某些挽救措施，但是會(huì )很困難，只適用于那些不可代替的細胞。簡(jiǎn)單的方法是訂購除去支原體的試劑盒。

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