如何消化讓細胞生長(cháng)的更好，養細胞關(guān)鍵還是在消化，以下介紹幾種細胞的消化方法

一、酶消化法

1、胰酶，這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。消化的時(shí)間根據細胞種類(lèi)、操作手法，溫度等因素而變化，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶，37℃一般在消化單層貼壁的細胞一般1-5分鐘就足夠了，用血清或者含血清的完-全培養基終止。

2、膠原酶，一般用于原代細胞消化，這種方法作用溫和，對細胞損傷較小，消化的時(shí)間也略長(cháng)，不推薦的原因是膠原酶有點(diǎn)小貴而且培養細胞株感覺(jué)沒(méi)有多大的必要。

二、離子螯合劑

不破壞細胞表面分子，僅與CAMs螯合，因此，如果檢測細胞表面分子的話(huà)，盡量，甚至是一定不要用酶消化法。

1、EDTA，一般濃度在0.02%左右，使用它來(lái)消化細胞時(shí)，注意它能顯著(zhù)影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶，而且它不能被終和，因此，消化下來(lái)的細胞一定要洗一遍。

三、物理法

直接吹打或用細胞刮刀，貼壁很牢的細胞可以使用這個(gè)方法，吹打和刮刀都會(huì )給細胞造成嚴重的損傷，建議不到萬(wàn)不得已不要使用此法。

四、冷凍法

采用細胞冷凍后收縮的原理，從而使細胞從培養瓶上脫落。優(yōu)點(diǎn)：對細胞損傷小，不需要中止或洗細胞，方便，不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊，又特別嬌氣的細胞。缺點(diǎn)：細胞常成小片脫落，重新鋪板后細胞生長(cháng)會(huì )有點(diǎn)聚團。常用于間充質(zhì)干細胞、DC細胞的消化，具體過(guò)程是：1、用較多的4℃的PBS洗滌一遍細胞，再加入適量的 4℃的PBS，靜置操作臺上，很快細胞受冷皺縮小片脫落，3、輕輕吹打，細胞即完-全脫落，4、按一定比例傳代。

細胞消化難題：

1，成團、絮狀：

消化液里加入edta可以減少細胞成團的現象，血清可以終止胰酶的作用，越好的血清使用的效價(jià)更高，用胰酶消化后加血清終止，如果消化液中加入了edta的話(huà)，就要將消化液倒干凈，如果細胞貼壁要求不是很?chē)栏竦脑?huà)，一般不需要進(jìn)行離心。

比如說(shuō)4T1細胞，這種細胞的貼壁能力天生很強，用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化10~12min。用PBS洗滌時(shí)要洗凈殘余的培養基，加入胰酶后在培養箱中消化(避免細胞室溫下受損以及在此溫度時(shí)胰酶活性最-強)至細胞收縮變圓(可顯微鏡下觀(guān)察)且有少許細胞脫落(呈流沙狀)，隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細胞很多且需要大量細胞實(shí)驗，則不能棄去胰酶)，加入培養基輕輕彈散(不能用無(wú)血清培養基或者PBS替代，否則細胞聚集成團塊或絮狀)。

也可以用2%利多-卡因消化5-8分鐘，然后再棄去。

消化過(guò)度怎么辦？

馬上用培養基中和，收集全部的細胞到無(wú)菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清，用全培重懸，換新的培養瓶繼續培養，狀態(tài)不好的細胞在培養的過(guò)程中會(huì )死亡脫落，在換液的時(shí)候可以清除掉。