血管生長(cháng)是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。通過(guò)抑制腫瘤血管生成來(lái)阻止腫瘤發(fā)展和轉移合乎邏輯。

      血管生成(angiogenesis)是生殖、生長(cháng)發(fā)育和修復的基礎。腫瘤無(wú)新生血管時(shí),直徑很少超過(guò)2 mm-3 mm,其生長(cháng)處于休眠狀態(tài)。當腫瘤原發(fā)灶或轉移灶長(cháng)大到一定程度,氧及營(yíng)養供應和代謝產(chǎn)物的排出就出現不足。一旦血管長(cháng)入腫瘤,供給腫瘤組織營(yíng)養和氧的方式由周邊彌散變成血液灌注,其代謝產(chǎn)物也能在血液循環(huán)時(shí)徹-底清除。腫瘤血管不僅為腫瘤提供營(yíng)養和氧,運走代謝產(chǎn)物,還決定腫瘤的病理生理、生長(cháng)、侵襲、轉移和對各種治療的反應 。該觀(guān)點(diǎn)于1971年經(jīng)Folkman梳理,加之隨后血管生長(cháng)因子被發(fā)現,這個(gè)問(wèn)題受到學(xué)術(shù)界極大重視,相關(guān)藥物研究也隨之蓬勃發(fā)展。

      腫瘤血管生成包括了以下五種方式 。血管生成 (angiogenesis)即腫瘤組織在原有微血管網(wǎng)的基礎上通 過(guò)“芽生"方式形成新血管;血管發(fā)生(vasculogenesis) 即血液或骨髓來(lái)源的內皮祖細胞形成新血管;血管套疊 (intussusception)即間質(zhì)組織摻入到已有的血管參與腫瘤血管的構成;馬賽克血管(mosaic vessel)即內皮細胞和分散的腫瘤細胞本身相間排列組成血管;血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry)即腫瘤細胞模擬并取代內皮細胞形成管腔樣結構。 

      體外的血管形成實(shí)驗成為研究的熱點(diǎn)，目前血管形成實(shí)驗一般都采用內皮細胞結合條件培養基或結合腫瘤細胞并接種于基底上就形成了三維網(wǎng)狀結構，觀(guān)察其形成的結構，之后通過(guò)各種軟件進(jìn)行定量分析。目前做的比較多的是內皮的小管形成：

1. 內皮的代數不能太多，若是HUVEC ，HMEC-1等細胞系去做此類(lèi)的實(shí)驗，建議細胞的代次控制在7代內，若細胞形態(tài)不好，與鋪板成管的關(guān)系會(huì )很大，所以在做實(shí)驗時(shí)，一定要在細胞具有最佳生長(cháng)狀態(tài)，最佳形態(tài)，并且無(wú)任何污染的情況下鋪板，細胞盡量鋪勻，要不然做出來(lái)的小管可能會(huì )存在斷點(diǎn)。

2. 原代內皮細胞做小管實(shí)驗，因為內皮細胞分離并不是想象中的剝下來(lái)就是內皮的那么簡(jiǎn)單，比如Cell Systems的原代細胞分離的標準就有很具體的說(shuō)明，細胞在P0的時(shí)候，基本是有雜質(zhì)的，然后需要進(jìn)行磁珠篩選或者酶消化一次，（cell systems的細胞為了讓科研用戶(hù)的實(shí)驗更不受抗體影響，一般不采用抗體篩選，這樣原代細胞在純化之后不會(huì )帶任何抗性，影響實(shí)驗最終的結果）所以原代的內皮在做小管實(shí)驗的時(shí)候盡量控制傳代的次數，最好做一個(gè)傳代的極限測試，然后再根據結果復蘇細胞進(jìn)行實(shí)驗。

3. 鋪板基質(zhì)膠的時(shí)候一定要注意：感覺(jué)這個(gè)玩意一定要好的品牌，好的品牌還挺貴的，所以不能浪費，鋪膠前可以用無(wú)血清的培養基先稀釋?zhuān)话闶?：2左右；（建議不稀釋用的心痛，稀釋太大怕成不了管的心理的同學(xué)可以嘗試一下）膠一個(gè)96 孔板一般是50ul左右，土豪可以試試24孔板鋪膠，相比下來(lái)面積更大，拍照的地兒也多，可以各種POSE擺起來(lái)，大佬可以試試血管生成的培養皿，這玩意簡(jiǎn)單省事，直接把細胞往上一蓋，坐等美圖自動(dòng)生成。

需要注意的點(diǎn)：配制試劑時(shí)，不要產(chǎn)生氣泡；加細胞懸液時(shí)，不要讓槍頭觸碰基質(zhì)膠，

4. 鋪細胞的密度要控制好，狀態(tài)和密度息息相關(guān)，若當心細胞不成管可以給它來(lái)點(diǎn)生長(cháng)因子如EGF,VEGF等。

5. 拍照的時(shí)間一定要掌握好，千萬(wàn)不能睡過(guò)頭，一般內皮細胞在鋪板后12小時(shí)開(kāi)始成管，24小時(shí)后開(kāi)始崩解；

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù)，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。