原代細胞都無(wú)法擴增幾輪增殖，這被稱(chēng)為Hayflick極限，因為每一輪的增殖都會(huì )縮短端粒。當端粒達到臨界縮短長(cháng)度時(shí)，DNA損傷被觸發(fā)，導致細胞衰老，如果你試圖培養一個(gè)珍-稀原代細胞群，當心它最終會(huì )死亡，可以對細胞進(jìn)行操縱，以繞過(guò)衰老過(guò)程并變得不朽，原代細胞永生化就是有這么神奇的事情。

自發(fā)性永生化細胞最-好-的例子就是癌細胞，它們可能經(jīng)歷了抵抗衰老的基因變化，并且開(kāi)始“長(cháng)生不老"。其實(shí)許多癌細胞株也沒(méi)有這種變化，事實(shí)上，喬治·蓋伊（George Gey）這位科學(xué)家創(chuàng )造了第一個(gè)永生的、可以說(shuō)是最著(zhù)名的細胞株：HeLa細胞，他在偶然發(fā)現亨麗埃塔（Henrietta）手術(shù)后的腫瘤內有高度化生長(cháng)子宮癌細胞，在此之前，他測試了數百個(gè)癌細胞以獲得永生的方法，但是都失敗了。

許多病毒基因影響細胞周期，因此可以通過(guò)消除增殖控制的生物剎車(chē)來(lái)克服衰老。其中許多是腫瘤抑制基因，因為它們需要抑制腫瘤的發(fā)生。其中最常見(jiàn)的是猿病毒大T抗原（SV-40）的過(guò)度表達，它抑制細胞的Rb基因和p53基因，這兩種基因都是細胞生長(cháng)周期的關(guān)鍵控制器。SV40永生化的細胞系著(zhù)名的例子是HEK293T，也稱(chēng)為293T細胞，這是一種廣泛用于表達病毒顆粒和細胞分析的細胞系，因為它們很容易轉染。其他病毒基因包括來(lái)自人乳頭瘤病毒（HPV）的基因，如E6和E7，它們也以Rb和p53基因為靶點(diǎn)，比如人支氣管上皮細胞HBE-E6E7等。

最著(zhù)名的不朽基因是端粒酶（hTERT）。端粒酶是一種核糖核蛋白，能夠延長(cháng)端粒的DNA序列，從而減緩衰老過(guò)程，使細胞經(jīng)歷無(wú)限的細胞分裂。事實(shí)上，端粒酶最近被認為是一種逆轉衰老的潛在機制。使用端粒酶逆轉衰老的問(wèn)題在于，端粒酶表達增加也會(huì )誘導腫瘤生長(cháng)。事實(shí)上，許多用于創(chuàng )造永生化細胞系的基因，如hTERT和SV40，都會(huì )誘導腫瘤形成。因此，毫不奇怪的是，hTERT經(jīng)常在人類(lèi)腫瘤中過(guò)度表達，從而賦予癌癥的一個(gè)關(guān)鍵特征：不受限制的增殖。這正是我們在使原代細胞系永生化時(shí)使用它的目的！

在某些類(lèi)型的細胞中，僅使用一種永生化方法可能會(huì )產(chǎn)生少量永生細胞。因此，根據您的細胞系，將腫瘤抑制因子（如上述細胞周期抑制劑）的抑制和hTERT的表達結合起來(lái)以增加更多的細胞永生化的可能。如果你想使你的細胞系永生化和轉化（即使其像致瘤細胞一樣），也建議使用這種雙重方法，因為有證據表明，如果沒(méi)有永生化，一些細胞系就不能進(jìn)行有效的轉化。

如何將永生引入原代細胞系

以上許多不朽的來(lái)源都是基于對原代細胞的基因操作。這需要將外源DNA導入細胞。由于許多原代細胞難以轉染，因此將基因改變引入原代細胞的最-簡(jiǎn)-單和最-有效的方法是通過(guò)病毒感染。

最-流-行的方法是通過(guò)復制缺陷慢病毒，因為它們比腺病毒安全，腺病毒具有重新感染細胞的能力，因此含有活病毒的時(shí)間更長(cháng)。逆轉錄病毒也可用于轉染細胞，然而，它們只能感染活躍分裂的細胞，從而減少可能被病毒轉導的細胞數量。

警告：原代細胞不朽可能不是最-好-的途徑！

通過(guò)將基因改變引入細胞，你可能正在深刻地改變細胞系的表型。雖然這確實(shí)使你的細胞系在某些方面更有用：它可能使你的細胞更同質(zhì)，從而可以輕松復制結果，你可以創(chuàng )建大量細胞供將來(lái)使用，并且它們可能更容易實(shí)驗，但使用原代細胞系仍然有許多好處，原代細胞可以保持正常細胞的新陳代謝，可以維持正常細胞的生理特征，并且具有實(shí)驗的統一性和重復性，但隨著(zhù)原代細胞的永生轉染，細胞群體和細胞機制發(fā)生改變，這可能會(huì )混淆您的實(shí)驗，并導致不確定或錯誤的結果。此外，關(guān)于永生化細胞如何準確地模擬真實(shí)組織還有很多爭論。

盡管存在爭議，但SV40不太可能感染人類(lèi)，盡管SV40的作用機制：p53和Rb突變可能是人類(lèi)腫瘤中非常常見(jiàn)的突變。因此，重要的是要確定最佳的基因操作來(lái)使用永生你的細胞類(lèi)型。

盡管永生化細胞在實(shí)驗研究中的效用非常強大，但在使用中必須接受一些警告。與任何實(shí)驗模型一樣，永生化細胞只是您預期細胞系統的模型。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù)，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。